Evaluación de novedosas metodologías analíticas ambientalmente compatibles para monitoreo terapéutico y estudios farmacocinéticos de antirretrovirales en fluidos biológicos

Abstract

Desde que surgieron los primeros casos de SIDA en 1981, la cantidad de infecciones por VIH recién diagnosticadas tienden a estabilizarse. El uso combinado de tres a cuatro antirretrovirales (ARV) diferentes, conocido como terapia antirretroviral altamente activa (TARGA), ha mejorado el estado clínico y la calidad de vida de pacientes infectados con el VIH. Los medicamentos genéricos son una alternativa asequible a los innovadores. Un genérico presenta la misma composición cualitativa y cuantitativa en principios activos y la misma forma farmacéutica que el innovador. Estos deben demostrar bioequivalencia respecto del producto innovador mediante ensayos de bioequivalencia clínica (BE) basados en la comparación de los perfiles farmacocinéticos del ingrediente farmacéutico activo (IFA) en fluidos biológicos. La validez de las pruebas estadísticas de bioequivalencia depende de la medición de los parámetros farmacocinéticos, por esta razón la confiabilidad de los resultados analíticos es un factor crítico. El objetivo general de este trabajo fue desarrollar y validar metodologías bioanalíticas para la evaluación simultánea de ARV usando HPLC con detección UV y espectrometría de masas en tándem (MS2 y MS3). Diferentes métodos de procesamiento de muestras (precipitación de proteínas, extracción en fase sólida y extracción de puntos de niebla) permitieron la cuantificación simultánea de diferentes ARV. Las metodologías se aplicaron en estudios de bioequivalencia de medicamentos antirretrovirales en voluntarios argentinos sanos, demostrando que no todas las formulaciones farmacéuticas son intercambiables en la práctica médica, por lo que los estudios de bioequivalencia son un paso indispensable para garantizar la calidad de los productos farmacéuticos.

Since the first AIDS cases began to emerge in 1981, the number of newly diagnosed HIV infections now tends to stabilize. The simultaneous use of three to four different antiretroviral agents (ARVs), a therapy known as Highly Active Antiretroviral Therapy (HAART), has improved the clinical status and quality of life for the majority of patients infected with HIV. Generic drugs are a more affordable and equally effective alternative to innovator medicines. A generic medicine presents the same qualitative and quantitative composition in active principles and the same pharmaceutical form as the innovator. In order to be used in general medicinal practice, generic medicines must demonstrate bioequivalence to the innovator through clinical bioequivalence (BE) trials. The validity of statistical tests of bioequivalence depends on the accurate measurement of pharmacokinetic parameters; for this reason the reliability of analytical results is a critical factor in BE trials. The general objective of this thesis work was to develop and validate bioanalytical methodologies for the simultaneous evaluation of several ARVs using HPLC with UV detection and tandem mass spectrometry (MS2 and MS3). Different methods of sample processing (protein precipitation, solid phase extraction and cloud point extraction) were developed, which allowed the simultaneous quantification of different ARVs in biological fluids. The methodologies were applied to BE trials of single ARV drugs and in HAART combinations in healthy Argentine volunteers showing that not all pharmaceutical formulations are interchangeable in medicinal practice. BE trails are therefore a crucial step for granting quality of generic pharmaceutical products before reaching patients.