https://hdl.handle.net/11185/13 2026-05-07T17:26:48Z 2026-05-07T17:26:48Z Iturraspe, Francisco https://hdl.handle.net/11185/8822 2026-05-06T16:37:55Z 2025-12-22T00:00:00Z

Tecnología de producción de muteínas hiperglicosiladas de eritropoyetina humana Iturraspe, Francisco La eritropoyetina humana (hEPO) ha sido propuesta como un candidato para el tratamiento de patologías asociadas al Sistema Nervioso Central (SNC). Con el objetivo de priorizar selectivamente las propiedades neurobiológicas de hEPO sin los efectos hematopoyéticos, se diseñaron 12 muteínas de hEPO mediante glicoingeniería por hiperglicosilación, que fueron expresadas en células CHO.K1. De las muteínas, 3 de ellas fueron previamente caracterizadas, obteniéndose resultados muy promisorios. En este estudio, las 9 variantes restantes fueron producidas, purificadas y caracterizadas mediante el análisis de sus propiedades fisicoquímicas y su función biológica in vitro. Las variantes con las mejores características (Mut 45_47 y Mut 104) fueron seleccionadas para ser expresadas en la línea celular HEK-293, con el objetivo de obtener perfiles de glicosilación más similares a la hEPO del SNC y comparar variantes expresadas en los distintos huéspedes celulares en términos de sus funciones biológicas. El análisis comparativo reveló que las variantes de HEK-293 poseen menor masa molecular y contenido de ácido siálico que sus análogos. Los ensayos biológicos in vitro confirmaron el bloqueo de la actividad eritropoyética y la preservación de la función neurobiológica. Aunque las variantes de HEK-293 presentaron propiedades farmacocinéticas menos favorables, no se observaron diferencias significativas entre líneas celulares en la actividad neurobiológica in vivo. Adicionalmente, todas las muteínas demostraron una actividad la molécula de rhEPO original. Los resultados obtenidos en la presente tesis perfilan a la línea celular HEK-293 como una plataforma de producción prometedora para análogos de hEPO con potencial terapéutico en patologías del SNC.; Human erythropoietin (hEPO) has been proposed as a candidate for Central Nervous System (CNS)-associated diseases. Aiming to selectively prioritize the neurobiological properties of hEPO while minimizing the effects associated with its erythropoietic activity, 12 hEPO muteins were previously designed in our laboratory using glycoengineering strategies through hyperglycosylation, which were expressed in CHO.K1 cells. Three of these muteins were previously characterized, yielding very promising results. In this study, the remaining 9 muteins were produced, purified, and characterized by studying their physicochemical properties and in vitro biological activity. The variants exhibiting the most favorable characteristics (Mut 45_47 and Mut 104) were selected for expression in the HEK-293 cell line. The objective was focused on obtaining muteins with a glycosylation profile similar to the hEPO physiologically produced in the CNS, and to compare variants expressed in different host cells in terms of their biological properties. Comparative analysis revealed that HEK-293-derived variants possess lower molecular mass and reduced sialic acid content compared to their counterparts. In vitro assays confirmed the ablation of erythropoietic activity and the preservation of neurobiological function. Although HEK-293 variants exhibited less favorable pharmacokinetic properties, no significant differences in in vivo neurobiological activity were observed between cell lines. Furthermore, all muteins demonstrated superior activity compared to the native rhEPO molecule. The findings of this thesis position the HEK-293 cell line as a promising production platform for hEPO analogs with therapeutic potential in CNS disorders, offering more favorable glycosylation profiles characterized by simpler, potentially less immunogenic glycans. Fil: Iturraspe, Francisco. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas; Argentina.

2025-12-22T00:00:00Z Berón, Ignacio José https://hdl.handle.net/11185/8821 2026-05-06T14:20:58Z 2026-03-20T00:00:00Z

Interacciones plantas-aves frugívoras en un gradiente latitudinal y biogeográfico en bosques de los dominios chaqueño y amazónico Berón, Ignacio José Este estudio analiza las interacciones planta-ave frugívora en dos dominios contrastantes de Santa Fe: el Paranaense (selvas en galería) y el Chaqueño (bosques xerofíticos). Mediante 14 campañas en un gradiente latitudinal (28°S-31°S) y el uso combinado de redes de niebla y transectas, se registraron 41 especies de aves, 46 de plantas y 203 interacciones únicas. Los resultados revelan que, aunque comparten especies de aves, las redes poseen arquitecturas distintas: la paranaense es más anidada, mientras que la chaqueña es más modular y especializada. Las familias Thraupidae, Turdidae y Tyrannidae actúan como núcleos funcionales del sistema. Se demuestra que el Río Paraná funciona como un corredor ecológico que mantiene la conectividad de la meta-red, contrastando con la fragmentación y el alto recambio de especies en el Chaco. El análisis mediante GLMM identifica a la estacionalidad (primavera-verano) como el factor determinante de la riqueza y actividad, superando las variaciones espaciales. Filogenéticamente, se observa una asimetría: los linajes de aves son similares entre dominios, pero las plantas presentan una marcada divergencia, sugiriendo que las aves generalistas mantienen el proceso ante ofertas florísticas disímiles. En conclusión, la arquitectura de estas interacciones mutualistas surge de la intersección entre historia evolutiva, conectividad fluvial y pulsos estacionales. Esta investigación aporta el primer análisis comparativo sistemático en la región, subrayando la importancia del corredor paranaense y la estabilidad de las familias clave para la regeneración y conservación de los bosques neotropicales.; This study analyzes plant-frugivorous bird interactions across two contrasting domains in Santa Fe, Argentina: the Paranaense (floodplain forests) and the Chaco (xerophytic forests). Through 14 field surveys along a latitudinal gradient ($28^{\circ}S$ to $31^{\circ}S$), utilizing mist nets and line transects, 41 bird species, 46 plant species, and 203 unique interactions were recorded.The results reveal that despite sharing many bird species, the networks exhibit distinct architectures: the Paranaense network is more nested, while the Chaco network is more modular and specialized. The Thraupidae, Turdidae, and Tyrannidae families function as the system's functional cores. Evidence shows that the Paraná River acts as an ecological corridor maintaining meta-network connectivity, in contrast to the higher fragmentation and species turnover observed in the Chaco.GLMM analysis identifies seasonality (spring-summer) as the primary driver of richness and frugivory, outweighing spatial effects. Phylogenetically, an asymmetry emerges: bird lineages remain similar across domains, whereas plants show marked divergence. This suggests that generalist birds maintain ecological processes across dissimilar floristic compositions.In conclusion, the architecture of these mutualistic interactions arises from the intersection of evolutionary history, fluvial connectivity, and seasonal pulses. This research provides the first systematic comparative analysis in the region, highlighting the importance of the Paraná corridor and the stability of key avian families for the regeneration and conservation of Neotropical forests. Fil: Berón, Ignacio José. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas; Argentina.

2026-03-20T00:00:00Z Leopold, María Jesús https://hdl.handle.net/11185/8820 2026-05-06T14:33:59Z 2026-04-10T00:00:00Z

Estrategia biotecnológica para la producción de proteínas terapéuticas altamente O-glicosiladas empleando nuevos péptidos bifuncionales Leopold, María Jesús Para enfrentar los desafíos inherentes al uso clínico de proteínas terapéuticas, se han desarrollado múltiples estrategias de diseño para optimizar su desempeño, orientadas tanto a mejorar sus propiedades como a generar herramientas analíticas confiables para su detección, cuantificación y purificación. En este contexto, los péptidos GMOP y mGMOP constituyen una plataforma innovadora con funcionalidad dual: permiten modular propiedades biológicas, y contienen un epitope reconocido por el anticuerpo monoclonal CC1H7, lo que posibilita su uso en métodos analíticos. GMOP posee cuatro sitios potenciales de O-glicosilación, mientras que mGMOP incorpora seis. Estudios previos con una única fusión a interferón-α2b (IFN-α2b) mostraron mejoras farmacocinéticas frente a IFN wild-type, sin diferencias entre etiquetas. En este trabajo se evaluó el efecto de fusionar múltiples copias para potenciar la actividad in vivo y evidenciar diferencias en contextos de hiper-O-glicosilación. Asimismo, se exploró su aplicación analítica y se validó el sistema en eritropoyetina (EPO), a través de la fusión de las etiquetas a esta proteína. Se desarrollaron métodos sensibles de cuantificación y detección junto con una estrategia de purificación con altos rendimientos. Las variantes mostraron mayor masa molecular, incremento de ácido siálico y mayor estabilidad, sin alterar la estructura global. Esto se tradujo en mejoras de los perfiles farmacocinéticos y en la eficacia in vivo, especialmente con mGMOP. La validación en EPO confirmó la versatilidad del sistema, permitiendo aplicar los métodos desarrollados y obteniendo mejoras farmacocinéticas con mayor potencia biológica. Las etiquetas constituyen una herramienta promisoria para el desarrollo de biofármacos; destacándose mGMOP en contextos de hiper-O-glicosilación.; To address the challenges associated with the clinical use of therapeutic proteins, multiple design strategies have been developed to optimize their performance. These approaches aim not only to improve their biological and pharmacokinetic properties but also to generate reliable analytical tools for their detection, quantification, and purification. In this context, the GMOP and mGMOP peptides represent an innovative dual-function platform: they enable modulation of biological properties while incorporating an epitope recognized by the monoclonal antibody CC1H7, facilitating their application in analytical methods. GMOP contains four potential O-glycosylation sites, whereas mGMOP includes six. Previous studies using a single fusion to interferon-α2b (IFN-α2b) demonstrated improved pharmacokinetics compared to the wild-type protein, with no significant differences between tags. In this work, the effect of fusing multiple copies was evaluated to enhance in vivo activity and reveal differences under hyper-O-glycosylation conditions. Additionally, their analytical applicability was explored, and the system was validated in erythropoietin (EPO) through tag fusion. Sensitive detection and quantification methods were developed, along with a high-yield purification strategy. The resulting variants exhibited increased molecular mass, higher sialic acid content, and improved stability without altering global structure. These changes translated into enhanced pharmacokinetic profiles and in vivo efficacy, particularly for mGMOP. Validation in EPO confirmed the versatility of the system, enabling the application of the developed methods and yielding improved pharmacokinetics with greater biological potency. These tags represent a promising tool for biopharmaceutical development, with mGMOP standing out in hyper-O-glycosylation contexts. Fil: Leopold, María Jesús. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas; Argentina.

2026-04-10T00:00:00Z Cunha Bolzico, Bruna https://hdl.handle.net/11185/8805 2026-04-24T13:17:08Z 2026-04-09T00:00:00Z

Estudio de bioprocesos para la fermentación de pentosas empleando Saccharomyces y levaduras no convencionales Cunha Bolzico, Bruna La generación sustentable de biocombustibles y bioproductos a partir de la lignocelulosa depende principalmente de levaduras que metabolicen eficientemente azúcares pentosa, principalmente xilosa y arabinosa. La levadura tradicional Saccharomyces cerevisiae carece de esta capacidad y requiere de ingeniería para reconfigurar su metabolismo. Sin embargo, la optimización de enzimas individuales no parece ser suficiente para alcanzar conversiones competitivas de pentosas. En contraste, diversas levaduras no convencionales fermentan pentosas directamente, constituyendo plataformas atractivas, pero menos exploradas, para bioprocesos. En esta tesis se abordó la utilización de pentosas por levaduras mediante la comprensión e ingeniería de los procesos moleculares de señalización, transporte y metabolismo. Se demostró que S. cerevisiae detecta xilosa extracelular a través del receptor de membrana Snf3p, generando una respuesta limitada y de baja afinidad. Se propuso entonces alterar la selectividad del sistema mediante la construcción de receptores quiméricos para mejorar la detección de xilosa y su utilización. Respecto a la captación de pentosas, se identificó un transportador novedoso de arabinosa, denominado AraSp, que al expresarse de manera heteróloga en S. cerevisiae mejoró considerablemente el consumo de dicho azúcar. Por último, los perfiles fermentativos de distintas especies no convencionales fueron comparados considerando el impacto de la aireación en el catabolismo de la xilosa. La levadura Spathaspora passalidarum mostró un desempeño destacado, aunque este se vio comprometido en hidrolizados lignocelulósicos. En conjunto, esta tesis aporta un abordaje integral de los determinantes moleculares que limitan la utilización de pentosas en levaduras y propone estrategias para mejorar su aprovechamiento en bioprocesos sostenibles.; Sustainable production of biofuels and biochemicals from lignocellulosic biomass relies largely on yeasts able to efficiently metabolize five-carbon sugars, primarily xylose and arabinose. The traditional yeast Saccharomyces cerevisiae is not inherently capable of this process and therefore requires metabolic reconfiguration. However, optimization of individual key enzymes is often insufficient to achieve robust pentose conversion. In contrast, several non-conventional yeast species can naturally ferment such sugars, making them attractive but less explored platforms for lignocellulosic bioprocessing. Therefore, this thesis aimed to enhance xylose and arabinose utilization in yeasts through the understanding and engineering of molecular processes involved in sugar sensing and uptake, and to explore the factors impacting pentose metabolism. The yeast S. cerevisiae was shown to detect extracellular xylose via the Snf3p membrane receptor, eliciting a low-affinity and non-specific response. Engineering of this signaling system was then proposed by designing and constructing chimeric receptors to improve xylose detection and utilization. Regarding pentose uptake, a novel arabinose transporter protein from Spathaspora passalidarum, named AraSp, was identified and characterized. Heterologous expression of an AraSp mutant variant that prevents transporter internalization promoted efficient arabinose consumption in S. cerevisiae. Finally, fermentative profiles of different non-conventional yeasts were compared, highlighting the impact of oxygenation on xylose catabolism. Sp. passalidarum showed remarkable performance during xylose consumption and ethanol production under limited aeration, although this behavior was compromised in lignocellulosic hydrolysates. Overall, this thesis deepens the understanding of the molecular determinants limiting pentose utilization in yeasts and proposes strategies to improve their utilization in sustainable bioprocesses. Fil: Cunha Bolzico, Bruna. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas; Argentina.

2026-04-09T00:00:00Z