https://hdl.handle.net/11185/336 2026-09-11T05:18:35Z 2026-09-11T05:18:35Z Gasser, Fátima Belén https://hdl.handle.net/11185/8977 2026-08-26T16:14:50Z 2026-07-28T00:00:00Z

Implementación de ensayos in vitro para la determinación de citotoxicidad y genotoxicidad de nuevos compuestos durante la evaluación preclínica Gasser, Fátima Belén El desarrollo de nuevos fármacos requiere una evaluación preclínica rigurosa que garantice su seguridad antes de la aplicación clínica. En este contexto, los ensayos in vitro han adquirido un rol central como métodos alternativos, en concordancia con los principios de las 3R, permitiendo evaluar efectos citotóxicos y genotóxicos de manera ética, reproducible y predictiva. El objetivo de esta Tesis Doctoral fue poner a punto y optimizar una batería de ensayos in vitro orientados a la evaluación de citotoxicidad y genotoxicidad de nuevos compuestos en etapa preclínica. Para ello, se evaluaron dos moléculas de interés biomédico: U-Omp19 y BSY02. Los estudios se realizaron en las líneas celulares de mamíferos CHO-K1 (ovario de hámster chino) y A549 (adenocarcinoma pulmonar humano), aplicando biomarcadores de efecto. Se incluyeron ensayos de citotoxicidad tales como viabilidad celular, apoptosis/necrosis, actividad de caspasa-3, análisis del ciclo celular, producción de especies reactivas del oxígeno, detección de histona fosforilada, ensayo de micronúcleos con bloqueo de citocinesis y ensayo cometa. Los resultados obtenidos indicaron que, bajo las condiciones experimentales evaluadas, U-Omp19 y BSY02 no indujeron citotoxicidad ni genotoxicidad significativa en comparación con los valores controles para cada tipo celular evaluado. En contraste, los controles positivos mostraron diferencias significativas respecto a los valores controles, confirmando la sensibilidad y robustez de los ensayos implementados. En conjunto, esta Tesis Doctoral aporta evidencia experimental sólida que respalda la seguridad preclínica de ambos compuestos y consolida una batería de ensayos in vitro aplicable a la evaluación genotóxica de nuevos fármacos, contribuyendo al desarrollo de estrategias experimentales más éticas, eficientes y alineadas con los requerimientos regulatorios actuales.; The development of new drugs requires rigorous preclinical evaluation to ensure their safety before clinical application. In this context, in vitro assays have acquired a central role as alternative methods, in accordance with the 3Rs principles, allowing for the ethical, reproducible, and predictive evaluation of cytotoxic and genotoxic effects. The objective of this doctoral thesis was to refine and optimize a battery of in vitro assays for evaluating the cytotoxicity and genotoxicity of new compounds in the preclinical stage. To this end, two molecules of biomedical interest were evaluated: U-Omp19 and BSY02. The studies were performed using the mammalian cell lines CHO-K1 (Chinese hamster ovary) and A549 (human lung adenocarcinoma), applying biomarkers of effect. Cytotoxicity assays were included, such as cell viability, apoptosis/necrosis, caspase-3 activity, cell cycle analysis, reactive oxygen species production, phosphorylated histone detection, micronucleus assay with cytokinesis blockade, and comet assay. The results obtained indicated that, under the evaluated experimental conditions, U-Omp19 and BSY02 did not induce significant cytotoxicity or genotoxicity compared to the control values for each cell type evaluated. In contrast, the positive controls showed significant differences compared to the control values, confirming the sensitivity and robustness of the implemented assays. Overall, this doctoral thesis provides solid experimental evidence supporting the preclinical safety of both compounds and consolidates a battery of in vitro assays applicable to the genotoxic evaluation of new drugs, contributing to the development of more ethical and efficient experimental strategies aligned with current regulatory requirements. Fil: Gasser, Fátima Belén. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina.

2026-07-28T00:00:00Z Furlán, Exequiel Oscar https://hdl.handle.net/11185/8961 2026-08-20T15:13:43Z 2026-07-03T00:00:00Z

Dinámicas de salud del pacú (Piaractus mesopotamicus) en sistemas productivos de Santa Fe Furlán, Exequiel Oscar La cría intensiva de pacú (Piaractus mesopotamicus) en jaulas flotantes del Sistema Fluvial del Paraná Medio (SFPM) enfrenta desafíos sanitarios asociados a la interacción entre parásitos, ambiente y manejo. Con el objetivo de evaluar integralmente la salud de los peces, se realizó un estudio observacional en sistemas productivos durante tres temporadas consecutivas, con muestreos previos a la siembra y durante el engorde, registrando calidad del agua y variables morfológicas, fisiológicas y parasitológicas. Complementariamente, se desarrolló un ensayo experimental de tres meses en juveniles expuestos a 21, 25 y 29°C. Se registró una comunidad parasitaria diversa, con nuevos reportes para la especie y la región. Las infestaciones se asociaron con alteraciones hematológicas y bioquímicas, confirmando que los parásitos comprometen la homeostasis del hospedador. La calidad del agua del SFPM fue, en general, adecuada para el cultivo; sin embargo, los biomarcadores fisiológicos se asociaron a estrés ambiental como hipoxia, pH elevado y enriquecimiento de nutrientes. Desde el punto de vista productivo, el cultivo en jaulas permitió alcanzar tallas comerciales en 4–5 meses con buena conversión alimentaria. Experimentalmente, 25°C fue la temperatura óptima, mientras que a 29 y 21°C se compromete la homeostasis. En conjunto, los resultados destacan que la salud del pacú depende de la interacción entre ambiente, parásitos y manejo, respaldando la implementación de programas de bioseguridad y monitoreo sanitario para fortalecer la sostenibilidad de la acuicultura regional.; Intensive farming of pacu (Piaractus mesopotamicus) in floating cages in the Middle Paraná River Floodplain System (MPRFS) faces health challenges arising from the interaction among parasites, environmental conditions, and farming practices. To comprehensively assess fish health, an observational study was conducted in commercial production systems over three consecutive production seasons, with sampling before stocking and during the grow-out period. Water quality, as well as morphological, physiological, and parasitological variables, were recorded. In addition, a three-month experimental trial was performed using juvenile pacu reared at 21, 25, and 29°C. A diverse parasite community was identified, including new records for both the host species and the region. Parasitic infestations were associated with hematological and biochemical alterations, confirming that parasites can compromise host homeostasis. Overall, water quality in the MPRFS was suitable for pacu farming; however, physiological biomarkers were associated with environmental stressors such as hypoxia, elevated pH, and nutrient enrichment. From a production perspective, cage farming enabled fish to reach market size within 4–5 months while maintaining good feed conversion efficiency. Under experimental conditions, 25°C proved to be the optimal rearing temperature, whereas both 21 and 29°C impaired physiological homeostasis. Overall, the findings demonstrate that pacu health is determined by the interaction among environmental conditions, parasites, and management practices, supporting the implementation of biosecurity measures and continuous health monitoring programs to enhance the sustainability of regional aquaculture. Fil: Furlán, Exequiel Oscar. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina.

2026-07-03T00:00:00Z Chacón, Camila Felisa https://hdl.handle.net/11185/8958 2026-08-18T14:49:48Z 2026-06-23T00:00:00Z

Evaluación de la exposición a agroquímicos sobre el metabolismo lipídico del yacaré overo (Caiman latirostris), su impacto en la fisiología reproductiva, e implicancias en la conservación, manejo y uso sustentable de la especie Chacón, Camila Felisa El creciente uso de agroquímicos en Argentina representa un problema de contaminación difusa por la magnitud y complejidad de las mezclas que afectan a los organismos no blanco, con posibles consecuencias poblacionales. Se evaluó el efecto de plaguicidas en concentraciones aplicadas a campo: glifosato (GLI, 1-2%), 2,4-D (0,06-0,12%), clorantraniliprole (CAP, 0,015-0,03%), imidacloprid (IMI, 0,1-0,2%) y tres mezclas a la menor concentración (M1: GLI+2,4-D; M2: CAP+IMI; M3: M1+M2) sobre el metabolismo lipídico y la fisiología reproductiva en Caiman latirostris tras exposiciones durante el desarrollo embrionario y a los seis meses de edad. Posteriormente, se evaluaron hembras y crías procedentes de ambientes perturbados y no perturbados. Los neonatos y crías expuestas experimentalmente, y los de áreas ambientalmente expuestos mostraron efectos adversos incluyendo alteración en la composición lipídica y de α-tocoferoles en la yema residual, alteraciones en el perfil lipídico plasmático, actividad hepática, desregulaciones en la expresión de genes asociados al metabolismo lipídico en hígado y sangre, daño histológico en hígado e intestino y desorganización gonadal, así como cambios en la condición corporal. Los niveles plasmáticos de hormonas sexuales se mantuvieron alterados incluso seis meses después de la exposición. Estos hallazgos demuestran que en estadios tempranos los caimanes son altamente sensibles a estos xenobióticos, afectando el metabolismo lipídico y la fisiología asociada. En individuos de ambientes naturales, el estado metabólico materno influyó en la programación metabólica de su descendencia, mostrando que la exposición crónica de las hembras podría trascender en la dinámica reproductiva de la especie incluso, con efectos transgeneracionales.; The increasing use of agrochemicals in Argentina represents a diffuse pollution problem due to the magnitude and complexity of the mixtures that affect non-target organisms, with potential population-level consequences. We evaluated the effects of pesticides at field-applied concentrations: glyphosate (GLY, 1-2%), 2,4-D (0.06-0.12%), chlorantraniliprole (CAP, 0.015-0.03%), imidacloprid (IMI, 0.1-0.2%), and three mixtures at the lowest concentrations (M1: GLI+2,4-D; M2: CAP+IMI; M3: M1+M2) on lipid metabolism and reproductive physiology in Caiman latirostris following exposures during embryonic development and at six months of age. Subsequently, females and offspring from disturbed and undisturbed environments were evaluated. Experimentally exposed hatchlings and yearlings, as well as individuals from environmentally exposed areas, showed adverse effects including alterations in the lipid and α-tocopherol composition of the residual yolk, changes in plasma lipid profiles, hepatic activity, dysregulation of lipid-metabolism gene expression in liver and blood, histological damage in liver and intestine, gonadal disorganization and changes in body condition. Plasma levels of sex hormones remained altered even six months after exposure. These findings demonstrate that early life stages of caimans are highly sensitive to these xenobiotics, affecting lipid metabolism and associated physiological processes. In individuals from natural environments, maternal metabolic status influenced the metabolic programming of their offspring, showing that chronic exposure of females could impact the reproductive dynamics of the species, potentially with transgenerational effects. Fil: Chacón, Camila Felisa. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina.

2026-06-23T00:00:00Z Engler, Carolina https://hdl.handle.net/11185/8942 2026-08-04T12:42:23Z 2026-07-23T00:00:00Z

Evaluación de la respuesta inmune innata frente a infecciones intramamarias por Staphylococcus aureus: Caracterización de linfocitos Tγδ bovinos Engler, Carolina El objetivo de esta tesis fue caracterizar a la población de linfocitos Tγδ luego de la interacción in vitro de células mononucleares con dos cepas de Staphylococcus aureus diferenciadas genotípica y fenotípicamente, aisladas de infecciones intramamarias (IIM) persistentes (P) y no persistentes (NP); y examinar su rol in vivo en un modelo de IIM experimental. Los estudios in vitro demostraron que los linfocitos Tγδ se activan tras el contacto con S. aureus, particularmente frente a la cepa 806 (NP), y que esta activación se potencia en presencia de otras poblaciones celulares. Asimismo, los linfocitos Tγδ contribuyen a la producción de IFN-γ e IL-17, mientras que TLR-2 no estaría involucrado en su activación. Además, los Tγδ modulan la activación de monocitos-macrófagos y la expresión de moléculas asociadas a la presentación antigénica de manera dependiente de la cepa. En el modelo in vivo, la cepa 806 (NP) indujo una respuesta inflamatoria temprana y eficaz, asociada a cambios en la frecuencia y el estado de activación de los linfocitos Tγδ, aumento de esta población en la leche y niveles elevados de IFN-γ e IL-17. En contraste, la cepa 5011 (P) mostró mayor capacidad para evadir estos mecanismos inmunes, favoreciendo el establecimiento de una infección persistente. Estos resultados demuestran que los linfocitos Tγδ participan en la respuesta inmune frente a S. aureus, y que las características genotípicas y fenotípicas de las cepas influyen en su comportamiento funcional, aportando información relevante para el diseño de estrategias de control de la mastitis bovina.; The aim of this thesis was to characterize the γδ T lymphocyte population following the in vitro interaction of mononuclear cells with two Staphylococcus aureus strains differing in their genotypic and phenotypic characteristics and isolated from persistent (P) and non-persistent (NP) intramammary infections (IMI), and to examine their role in vivo in an experimental IMI model. In vitro studies demonstrated that γδ T lymphocytes become activated upon contact with S. aureus, particularly in response to strain 806 (NP), and that this activation is enhanced in the presence of other immune cell populations. Moreover, γδ T lymphocytes contribute to IFN-γ and IL-17 production, whereas TLR-2 does not appear to be the main receptor involved in their activation. In addition, γδ T cells modulate monocyte–macrophage activation and the expression of antigen presentation–associated molecules in a strain-dependent manner. In the in vivo model, strain 806 (NP) induced an early and effective inflammatory response, which was associated with changes in the frequency and activation status of γδ T lymphocytes, an increase in this population in milk, and elevated local levels of IFN-γ and IL-17. In contrast, strain 5011 (P) exhibited a greater capacity to evade these immune mechanisms, thereby promoting the establishment of a persistent infection. Taken together, these results demonstrate that γδ T lymphocytes participate in the immune response to S. aureus, and that the genotypic and phenotypic characteristics of the strains influence their functional behavior, providing relevant information for the design of strategies to control bovine mastitis. Fil: Engler, Carolina. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina.

2026-07-23T00:00:00Z