Alternativas tecnológicas para la determinación de fármacos de estrecho margen terapéutico en fluidos biológicos. Aplicación en monitoreo terapéutico de drogas (MTD), validación del método analítico y estudios de bioequivalencia

Abstract

Se desarrollaron y validaron metodologías analíticas en matrices biológicas para la determinación de ingredientes farmacéuticos activos (IFAs) de productos farmacéuticos (de estrecho rango terapéutico y antirretrovirales) por cromatografía líquida acoplada a espectrometría de masas triple cuadrupolos en tándem y a detector ultravioleta (UV). Las metodologías fueron aplicadas en estudios de biodisponibilidad comparada (BDC) en humanos y en animales con el objetivo de obtener información que permita realizar comparaciones entre matrices clásicas y alternativas; y entre diseños experimentales clásicos y de bloque, como también evaluar diversas técnicas de preparación de muestras. Las metodologías fueron validadas bajo normas nacionales e internacionales. Las cifras analíticas de méritos se encontraron dentro de los criterios de aceptación de la guías nacionales e internacionales: exactitud entre el 85 % - 115 % (LIC entre 80 % - 120 %); CV % < 15 (LIC < 20 %); recuperación y efecto matriz con CV % < 15; y estabilidades del IFA que cubrieron los plazos de almacenamiento. Los parámetros de bioequivalencia (Cmáx, Tmáx y AUC) fueron utilizados para correlacionar los resultados. También se llevó a cabo la síntesis de un estándar interno y su posterior evaluación en muestras reales (E %: 85 - 115; CV % < 15), utilizando todas las funciones del LC-MS/MS Q-Trap para la caracterización de los mismos. Se concluye que las matrices estudiadas con las metodologías desarrolladas en esta tesis pueden ser aplicadas en estudios de BDC y en monitoreo terapéutico de drogas (MTD), proporcionando no solo información valiosa sobre aspectos farmacocinéticos y farmacodinámicos, sino también aportando ventajas analíticas, éticas y de bioseguridad.

Analytical methodologies were developed and validated in biological matrices for the determination of IFAs of pharmaceutical products (of narrow therapeutic range and antiretrovirals) by liquid chromatography coupled to triple quadrupole mass spectrometry in tandem and to UV detector. Methodologies in BDC studies in humans and animals were applied in order to obtain information that allows to perform comparisons between classical and alternative matrices and between classic and block experimental designs, as well as to evaluate the performance of different sample preparation techniques. Methodologies were validated within national and international standards. The merit analytical figures were found within the acceptance criteria of the national and international guidelines: accuracy between 85 % -115 % (LIC between 80 % - 120 %); CV % < 15 (LIC < 20 %); recovery and matrix effect with CV % < 15; and IFA stabilities that covered the samples storage period. In order to correlate the results, bioequivalence parameter (Cmax, Tmax and AUC) were used. Internal standard synthesis was also carried out and its subsequent evaluation in real samples (E %: 85 - 115, CV % < 15), using the full functions of the LC-MS/MS Q-Trap for their characterization. Matrices studied with the methodologies developed in this thesis can be applied in BDC and TDM studies, not only providing valuable information regarding pharmacokinetic and pharmacodynamics issues, but also providing analytical, ethical and biosecurity advantages.