Fagos autóctonos de Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus: caracterización y descripción de su interacción con sus cepas sensibles

Abstract

Se aislaron y caracterizaron tres fagos autóctonos específicos de las cepas de Lb. delbrueckii subsp. bulgaricus YSD V (fago BYM), Ab1 (fago YAB) e Ib3 (fago Ib3). Las micrografías electrónicas demostraron que los tres fagos pertenecen al grupo B y al morfotipo B1, familia Siphoviridae. Cuando se estudió la resistencia térmica, se comprobó un efecto protector de la leche al ser usada como medio de suspensión. El ácido peracético fue el biocida más efectivo para la eliminación de las partículas fágicas. El fago Ib3 reveló una singular resistencia al hipoclorito de sodio. Los genomas fágicos oscilaron entre 31 y 34 kb, presentando perfiles de restricción distintos. El fago Ib3 fue el único que presentó extremos cohesivos. La formación de placas de lisis en medio agarizado se vio afectada por la ausencia del ión Ca2+, aunque estos fagos no dependieron de la presencia del ion Ca2+ para llevar a cabo la primera etapa del ciclo lítico, demostrando una rápida adsorción a sus cepas sensibles. Los fagos se adsorbieron sobre las células de Lb. delbrueckii subsp. bulgaricus incluso a 0 ºC. Estos fagos se adsorbieron normalmente tanto a células viables como no viables. La disminución en los porcentajes de adsorción de los fagos a las paredes celulares tratadas con TCA sugiere que los receptores podrían ser de naturaleza hidrocarbonada. Por último, se demostró la irreversibilidad de la adsorción de las partículas virales a sus cepas sensibles.

The aim of this work was to study the interaction between L. delbrueckii subsp. bulgaricus strains and indigenous phages isolated from failed yogurt manufactures in local industries. Three indigenous phages were isolated from strains L. delbrueckii subsp. bulgaricus YSD V (phage BYM), Ab1 (phage YAB) and Ib3 (phage Ib3). Electronic micrographies showed that the 3 phages belong to group B and morphotype B1, Siphoviridae family. A clear protective effect of the milk was revealed when it was used as suspension media when thermal inactivation of phages was assayed. Regarding on the effects of biocides on phages, only peracetic acid was found to be effective for inactivating high titre suspensions. Phage Ib3 showed to be specially resistant to high concentrations of sodium hypolchlorite. Indigenous phage genomes were linear and double-stranded DNA molecules of approx. 31–34 kbp, with distinctive restriction patterns. Only the phage Ib3 genome appeared to contain cohesive ends. Calcium ions did not influence phage adsorption, but it was necessary to accelerate cell lysis and improve plaque formation. The adsorption kinetics were similar on viable and nonviable cells, revealing that phage receptors are thermo-resistant, and adsorption step do not rely on the cells viability. The adsorption rates were high even at 0 °C. TCA treatments markly influenced the phage adsorption, reducing it appreciably. This study also revealed the irreversibility of phage adsorption to their hosts.