Obtención de anticuerpos recombinantes anti-IFN-alfa2b destinados a uso terapéutico humano

Abstract

La expresión endógena aumentada de IFN alfa se asocia a numerosas desórdenes inflamatorios y enfermedades autoinmunes donde la citoquina puede ser un factor en el inicio o en el mantenimiento de la patología. En la actualidad, varios mAbs se comercializan para numerosas indicaciones y muchos se encuentran en etapas de ensayos clínicos, representando el IFN alfa un potencial candidato para este tipo de terapias basadas en anticuerpos. En el presente trabajo se obtuvo un fragmento recombinante a partir de un mAb (CA5E6) seleccionado por sus características de unión con el rhIFN α2b que fue capaz de inhibir la acción antiviral de un conjunto heterogéneo de hIFN αs, optimizándose su afinidad hasta el punto, en una primera instancia, de incrementar el valor de la correspondiente al mAb completo original. Por otro lado, se evaluó la actividad neutralizante in vivo de la actividad antitumoral por parte del mAb CA5E6 parental utilizando células PC 3 tumorales humanas implantadas en ratones nude atímicos. En este ensayo se observó que los grupos de ratones correspondientes a los tratamientos con rhIFN alfa2b y con esta citoquina en presencia del mAb CA5E6 exhibieron una diferencia significativa entre los pesos promedios de los tumores correspondientes a los dos tratamientos . Asimismo, no se observó diferencia significativa entre el grupo control (sin rhIFN alfa2b) y el grupo de animales tratados con el mAb CA5E6, confirmando el bloqueo de la actividad biológica del IFN.

Despite IFN-alpha presents antiviral and antiproliferative activities, and thus being indicated for certain viral infections and tumour treatment, its increased endogenous expression is associated with inflammatory disorders and autoimmune illnesses, in which cytokine can be a factor either in the beginning or in the maintenance of the pathology. Nowadays, various mAbs are commercialized for numerous indications and many of them are in clinic test stage, being IFN-alpha a potential candidate for these type of antibody-based therapies. A recombinant fragment was obtained from a mAb (CA5E6) selected from its interaction characteristics with the rhIFN-alpha2b capable to inhibit the antiviral action of an heterogeneous group of hIFN-αs, optimizing its affinity up to the point to, in a first instance, increase the value of the corresponding to the original complete mAb. Besides, the in vivo neutralizing activity of the parental CA5E6 mAb antitumoral activity was evaluated, using humane tumoral PC-3 cells implanted in atomic nude mice. It was observed that the groups of mice corresponding to the treatment with rhIFN alpha2b and with this cytokine in presence of the CA5E6 mAb, exhibited a significant difference in the average weight of both treatments . Additionally, the control group (rhIFN-alpha2b) and the group of animals treated with the CA5E6 mAb did not show a significant difference, confirming the blockage of the IFN biological activity. It is possible to conclude that the CA5E6 mAb was capable of neutralizing the cytokine’s antiproliferative action in an in vivo system, projecting the therapeutical potential of this immunoglobulin.