Desarrollo y evaluación de diferentes plataformas diagnósticas para la detección de la Enfermedad de Chagas connatal

Abstract

La transmisión vertical es la principal vía de contagio de la enfermedad de Chagas en áreas libres del vector. Puede prevenirse mediante el tratamiento temprano de los niños infectados; sin embargo, las barreras de accesibilidad a los servicios de salud y las limitaciones del diagnóstico actual demoran la confirmación del resultado y propensan la pérdida de pacientes. El objetivo de la Tesis fue desarrollar diferentes plataformas diagnosticas mediante ensayos de ELISA e Inmunoensayo de flujo lateral (IFL) para la detección de la enfermedad de Chagas vertical (ECv). En primer lugar, se obtuvo una nueva proteína quimérica, CP4, compuesta por 5 antígenos (Ag) especificos de T. cruzi. Luego se desarrolló un ELISA de captura de anticuerpos (Ac) IgM utilizando CP4 y se evaluó frente a un panel sueros de bebés. Posteriormente se acopló con éxito el ensayo a telefonía celular, ELISA POCT. Por otro lado, se abordó el desarrollo de dos estrategias diagnosticas: un ELISA de Avidez y un ELISA indirecto utilizando el Ag SAPA y se evaluaron frente a sueros de binomios mamá-bebé para la detección de Acs IgG anti-SAPA. Por último, basado en la captura de Ac IgM y utilizando el Ag CP4, evaluamos dos prototipos de ensayos de IFL frente a sueros de bebé. Las estrategias propuestas, mostraron potencialidad para el diagnóstico de la ECv. Cabe destacar que tanto la estrategia de ELISA POCT como la de IFL son valiosas herramientas que permiten un diagnóstico rápido, de fácil adaptabilidad para uso en establecimientos de atención primaria de salud.

Vertical transmission is the primary route of Chagas disease transmission in vector-free areas. Early treatment of infected children can prevent it. However, barriers to accessing healthcare services and the limitations of current diagnostics delay result confirmation and lead to patient loss. The Thesis aimed to develop various diagnostic platforms using ELISA and Lateral Flow Immunoassay (LFA) assays for detecting vertical Chagas disease (vCD). Initially, a new chimeric protein, CP4, comprising 5 T. cruzi-specific antigens (Ag), was obtained. Subsequently, an IgM antibody (Ab) capture ELISA was developed using CP4 and assessed with a panel of infant sera. Following this, the assay was successfully adapted for mobile phones, creating an ELISA POCT. On the other hand, the development of two diagnostic strategies was addressed: an Avidity ELISA and an indirect ELISA employing the SAPA Ag, both evaluated with sera from mother-baby pairs to detect anti-SAPA IgG Abs. Lastly, based on capturing IgM Abs using the CP4 Ag, two prototypes of LFA assays were evaluated against baby sera. The proposed strategies exhibited potential for vCD diagnosis. It's important to note that both the ELISA POCT and LFA strategies are valuable tools enabling rapid diagnosis, easily adaptable for use in primary healthcare facilities.