Diseño de un Sistema Microbiológico en Microplacas Elisa (SMME) para la detección e identificación de residuos de antimicrobianos en la leche

Abstract

Los Sistemas Microbiológicos Multiplacas (SMMP) que utilizan placas de Petri, permiten identificar residuos en familias de antibióticos mediante la medición de los halos inhibitorios. Estos sistemas son lentos en brindar la respuesta (18 a 24 horas) y difíciles de implementar como métodos de rutina en los laboratorios lactológicos. Esta tesis propone reemplazar los SMMP por sistemas microbiológicos en microplacas (SMmp) que otorguen una respuesta en un tiempo reducido (4 a 6 horas), mediante respuestas dicotómicas debido a cambios en la coloración de los indicadores. Mediante técnicas de diseño experimental se optimizaron cinco bioensayos para la detección-identificación de: betalactámicos (Bioensayo “B”, Geobacillus stearothermophilus), betalactámicos-tetraciclinas (Bioensayo “BT”, G. stearothermophilus con cloranfenicol), betalactámicos-sulfamidas (Bioensayo “BS”, G. stearothermophilus con trimetoprima), tetraciclinas (Bioensayo “T”, B. cereus con cloranfenicol) y sulfamidas (Bioensayo “S”, B. subtilis con trimetoprima). Se concluye que una adecuada “detección” de antibióticos en leche se logra cuando se emplean simultáneamente Bioensayo “BT” (betalactámicos y tetraciclinas, tilosina) y Bioensayo “S” (sulfamidas, quinolonas, macrólidos, neomicina). Para lograr una correcta “identificación” de residuos se sugieren dos combinaciones de bioensayos. Una estrategia consiste en emplear los Bioensayos “BT”, “BS” y “S”, mientras que la segunda alternativa es utilizar los Bioensayos “B”, “T”, “S” y “BS”. En ambos casos, se logra identificar residuos de betalactámicos, tetraciclinas, sulfamidas y quinolonas. Los “Sistemas Microbiológicos en microplacas” (SMmps) desarrollados en este trabajo identifican residuos de cuatro familias de antibióticos, que en un futuro pueden incrementarse mediante la incorporación de nuevos bioensayos.

Multiplates Microbiological Systems (MPMS) using Petri dishes, allow the identification of antibiotic residues in families by measuring of the inhibitory halos. These systems are slow to provide the answer (18 to 24 hours) and difficult to implement as routine methods in lactological laboratories. This thesis proposes to replace the MPMS for microbiological systems in microplates (SMmp) that provide a response within a limited time (4 to 6 hours), using dichotomous responses due to changes in the color of the indicators. Five bioassay were optimized by mean of experimental design techniques for detection-identification of: betalactams (Bioassay “B”, Geobacillus stearothermophilus), betalactams-tetracyclines (Bioassay “BT”, G. stearothermophilus with chloramphenicol), betalactams-sulfamides (Bioassay “BS”, G. stearothermophilus with trimetoprim), tetracyclines (Bioassay “T”, B. cereus with chloramphenicol) and sulfamides (Bioassay “S”, B. subtilis with trimetoprim). To summarize, the simultaneous use of Bioassay “BT” (beta-lactams, tetracycline and tylosin) and Bioassay "S" (sulfonamides, quinolones, macrólidos and neomycin) provide an appropriate analytical strategy for “detecting” antibiotic residues in milk. A proper "identification" of residues was obtained by means of two combinations of bioassays from both SMmp. A strategy is use the Bioassay "BT", "BS" and "S", while that the second alternative is to use Bioassays "B", "T", "S" and "BS". For both combinations of methods, one can identify residues of beta-lactams, tetracycline, sulfonamides and quinolones The “Microbial Systems in microplates” (SMmps) developed in this study identify residues from four families of antibiotics, however in the future; it must increase by means of incorporate of new bioassays.