Actividad bacteriostática y bactericida de antibióticos betalactámicos y glucopéptidos frente a cepas de Staphylococcus aureus de importancia clínica. Caracterización genotípica de aislamientos tolerante

Abstract

Staphylococcus aureus(SA) es un patógeno humano. Se estudió: 1) 109 SAmeticilino-sensible (SAMS)-(2006-2007), 2) 112 meticilino-resistenteSA(SAMR)-(2006-2008) de pacientes que asistieron al Hospital Cullen, Santa Fe-Argentina. Objetivos SAMS: detectar actividades bacteriostáticas y bactericidas (AB) para cefalotina(CEF), distinguir cepas tolerantes según diferentes criterios, analizar genes mecA, hlg y pvl por PCR en SAMS tolerantes y proponer una técnica simple para determinar ABCEF. CIM y CBM se determinaron por macrodilución en caldo. Aislamientos con CEFCBM/CIM>8 se estudiaron por CM. CEFCIM50/90 y CEFCBM50/90 fueron 0,5/1 y 1/8 µg/mL.Según CBM/CIM: 6 tolerantes, ABCEF: 77,1%. CM: 4 tolerantes mecA(-), ABCEF 99,1%. Con la simple técnica usando discos de CEF, oxacilina y cefoxitina goteados con betalactamasa casera para detectar ABCEF, oxacilina resultó la mejor. Objetivos SAMR: detectar actividades bacteriostática y AB para vancomicina (VAN), distinguir cepas tolerantes según distintos criterios, investigar polimorfismo genómico entre cepas VAN-tolerantes, estudiar VANBA contra SA adquiridos en la comunidad (SAMR-AC) y su relación con la leucocidina de Panton-Valentine(LPV), estudiar actividad sinérgica de VAN con ciprofloxacina, gentamicina, rifampicina e imipenem con VAN-tolerantes. VANCIM50/90 y VANCBM50/90 fueron 0,5/1 y 1/8 µg/mL. Según CBM/CIM: 12 tolerantes, ABVAN: 65,2%. CM: 4 tolerantes y ABVAN: 96,4%. Los 4 tolerantes pertenecieron a dos clones. ABVAN in CA-SAMR fue 96% indepediente de la producción de LPV pero las LPV(+) redujeron más lentamente el inóculo inicial a las 6 h por CM. Todas las combinciones fueron sinérgicas. Conclusión: CEF y VAN pueden ser utilizadas en el hospital Cullen-Santa Fe-Argentina y ABVAN frente a CA-SAMR fue independiente de la presencia de LPV.

Staphylococcus aureus (SA) is an important human pathogen. Tests to study antimicrobial susceptibility are: Minimum Inhibitory Concentration(MIC), Minimum Bactericidal Concentration(MBC) and Time-kill studies(TKS). This thesis analyzed: 1) 109 methicillin-susceptible (MSSA)-(2006-2007) and 2) 112 methicillin-resistant (MRSA)-(2006-2008) from patients attending Cullen Hospital at Santa Fe-Argentina. MSSA: detect cephalotin (CEP) inhibitory and bactericidal activities (BA), distinguish tolerant strains according to different criteria; analyze mecA, hlg and pvl genes by PCR in tolerant MSSA and propose a simple technique to determine CEPBA. MIC and MBC were studied by broth macrodilution; isolates showing CEPMBC/MIC≥8 were studied by TKS. CEPMIC50/90 and CEPMBC50/90 were 0,5/1 and 1/8 µg/mL. According MBC/MICratio: 6 tolerant, CEPBA 77,1%. TKS: 4 tolerant mecA negative and CEPBA 77,1%. By simple methodology using CEP, oxacillin and cefoxitin disks dropped with at-house betalactamase solution, oxacillin resulted the best one. MRSA: detect VAN bacteriostatic and BA, distinguish tolerant strains according different criteria, investigate genomic polimorfism among VAN-tolerant-MRSA, study VANBA against community-acquired-MRSA and its relationship with PVL production, study VAN synergical activity with ciprofloxacin, gentamicin, rifampin and imipenem against VAN-tolerant-MRSA. VANMIC50/90 and VANMBC50/90 were 0,5/1 and 1/8 µg/mL. According MBC/MICratio: 12 tolerant, VANBA 65,2%. TKS: 4 tolerant and VANBA 96,4%. The four VAN-tolerant-MRSA belonged to 2 clones. VANBA in CA-MRSA was 96% independently from PVL production but PVL(+) strains reduce more slowly initial inoculum at 6 hours by TKS. All antimicrobial combinations were synergistics. Conclusion: CEP and VAN may continue to be used in Cullen Hospital-Santa Fe- Argentina and VANBA against CA-MRSA was independent from PVL presence.