Desarrollo y validación de un panel de ensayos de PCR multiplex en tiempo real para el monitoreo de bacterias patógenas específicas en animales de laboratorio.

Abstract

Los ensayos biológicos con animales de laboratorio son fundamentales en las ciencias biomédicas, e indispensables durante la fase preclínica del desarrollo de nuevos fármacos. En este contexto, el estado de salud de los animales puede ejercer una profunda influencia sobre los resultados experimentales. La forma de evitar los efectos negativos de las infecciones naturales es mediante un monitoreo de los agentes infecciosos para lograr un animal de calidad microbiológica definida. Numerosos microorganismos son responsables de estas infecciones, la mayoría de las cuales no van acompañadas por signos clínicos. Esto significa que la ausencia de manifestaciones clínicas tiene un valor diagnóstico limitado y, por lo tanto, es necesario disponer de métodos de monitoreo microbiológico de alta sensibilidad y especificidad. La eficiencia de los programas de monitoreo, control y erradicación de enfermedades infecciosas en un bioterio o centro de ensayos se basa no solo en un diagnóstico rápido, sensible y específico de los agentes causales en los animales; sino además en identificar reservorios y fómites, analizando el resultado de procesos críticos como limpieza y esterilización de equipos, instalaciones e insumos. Los programas de monitoreo de calidad microbiológica también son exigidos por las agencias regulatorias de registro de fármacos y, por lo tanto, deben estar asociados a un proceso de control de calidad. Únicamente con un control riguroso, estandarizado y sistemático, las unidades experimentales podrían asegurarse la calidad de los animales utilizados en los ensayos. En nuestro país existen escasos servicios de monitoreos lo suficientemente estrictos y que cumplan con los requisitos de acreditaciones y certificaciones que imponen las agencias regulatorias. Por otra parte, el uso de los servicios del exterior implica trastornos considerables en la logística de importación y exportación de insumos y muestras biológicas, y costos muy elevados. En este marco, el proyecto presentado apunta al desarrollo y validación de métodos analíticos para el monitoreo de bacterias patógenas específicas en colonias de animales de laboratorio y su entorno, basados en la técnica de PCR multiplex en tiempo real que puedan ser incorporados a los monitoreos de rutina del Centro de Medicina Comparada y a otros bioterios del país. La propuesta contribuirá a mejorar la calidad microbiológica de los animales utilizados en estudios preclínicos y en las investigaciones en general.

Biological assays with laboratory animals are essential in the biomedical sciences, and indispensable during the preclinical phase of the development of new drugs. In this context, state of health of the animals can exert a profound influence on the experimental results. The only way to avoid the negative effects of natural infections is by monitoring infectious agents to achieve an animal of defined microbiological quality. Numerous microorganisms are responsible for these infections, most of which are not accompanied by clinical signs. This means that the absence of clinical manifestations has limited diagnostic value and, therefore, it is necessary to have highly sensitive and specific microbiological monitoring methods. The efficiency of the monitoring, control and eradication programs of infectious disease in a bioterium or center of assays is based not only on a quick, sensitive and specific diagnosis of the causal agents, but also on approach the problem in an integral mode. Thus, it is necessary not only to monitor the animals, but also to identify reservoirs and fomites, analyzing the result of critical processes such as sterilization and cleaning of equipment, facilities and supplies. Microbiological quality monitoring programs are also required by regulatory agencies of drug registration and therefore, such programs must be associated with a quality control process. Only with a strict, standardized and systematic control, the experimental units could ensure the quality of the animals used in the trials. In our country, there are few and limited monitoring services that are sufficiently strict and fulfill with the accreditation and certification requirements imposed by regulatory agencies. On the other hand, the use of foreign services implies considerable drawbacks in the logistics of import and export of supplies and biological samples, as well as very high costs. In this framework, the presented project aims at the development and validation of analytical methods for the monitoring of specific pathogenic bacteria in colonies of laboratory animals and their environment, based on the multiplex real-time PCR technique that can be incorporated into the monitoring of routine of the Centro de Medicina Comparada and other bioterios in the country. The proposal will contribute to improving the microbiological quality of animals used in preclinical studies and in research in general.