Bioensayo que emplea Geobacillus thermoleovorans como bacteria-test para la detección de residuos de antibióticos en la leche

Abstract

La leche bovina representa el 78% de la producción mundial láctea, considerándose una actividad productiva muy importante debido al elevado y variado consumo de sus subproductos. En los últimos años, en Argentina se han priorizado el pago de calidad basado en parámetros higiénico-sanitarios (recuento de bacterias y células somáticas) además del control de los residuos de antibióticos en la leche. Todo ello constituye una medida de seguridad, tanto para los consumidores como para las empresas lácteas. Por estos motivos, el objetivo del presente trabajo fue diseñar un bioensayo de inhibición microbiológica en microplacas de titulación que permita detectar residuos de antimicrobianos en la leche mediante el empleo de Geobacillus thermoleovorans como bacteria-test, que brinde una respuesta en un tiempo inferior a los actuales métodos microbiológicos comerciales. En una primera etapa se calcularon los límites de detección en placas de Petri, posteriormente se diseñó un bioensayo en placas de microtitulación. El bioensayo contuvo medio Mueller Hinton (38 g/l, pH 8,5) fortificado con D-glucosa (10 g/l) y ácido clavulánico (6 mg/l) para mejorar la sensibilidad a las penicilinas, esporas de Geobacillus thermoleovorans (1,5 109 esp/ml) con una mezcla de indicadores de óxido reducción. Se concluye que este bioensayo presenta una respuesta dicotómica en un breve tiempo (1:30 horas) y posee limites de detección cercanos a las CIM para detectar residuos de penicilinas (3 µg/l de amoxicilina, 4 µg/l de ampicilina, 80 µg/l de cloxacilina, 34 µg/l de oxacilina y 4 µg/l de penicilina), cefalosporinas (140 µg/l de ceftiofur), macrolidos (140 µg/l eritromicina, 110 µg/l de lincomicina, 47 µg/l de tilmicosina y 55 µg/l de tilosina) y neomicina (540 µg/l), no presentando adecuada sensibilidad para tetraciclinas, sulfamidas y quinolonas en leche.

Bovine milk represents 78% of world milk production, considering a very important productive activity due to the high and varied consumption of their products. In recent years, Argentina has been prioritized payment based quality health and hygiene (bacterial count and somatic cells) parameters beyond the control of antibiotic residues in milk. all this is a safety measure for both consumers and dairy firms. On these grounds the objective of this work was to design a bioassay of microbial inhibition in microtiter plates to detect antimicrobial residues in milk by using Geobacillus thermoleovorans as bacteria-test, which provides a response time less than the current commercial microbiological methods. In a first stage detection limits in Petri dishes were calculated, later a bioassay designed in microtiter plates. The bioassay contained Mueller Hinton broth (38 g / l, pH 8.5) fortified D-glucose (10 g / l) and clavulanic acid (6 mg / l) to improve the sensitivity to penicillins, Geobacillus thermoleovorans spores (1.5 109 sperm / ml) with a mixture of oxide reduction indicators. It is concluded that this bioassay presents a dichotomous response in a short time (1:30 hours) and it has detection limits near the CIM residues of penicillins (3 g / l of amoxicillin, 4 mg / l ampicillin, 80 g / l of cloxacillin, 34 g / l of oxacillin and 4 g / l of penicillin), cephalosporins (140 g / l of ceftiofu), macrolides (140 mg / l erythromycin, 110 mg / l lincomycin, 47 g / l tilmicosin and 55 g / l of tylosin) and neomycin (540 ug / l), not presenting adequate sensitivity to tetracyclines, sulfonamides and quinolones in milk.