L. (Francis 2004) y P. cupana Kunth “Guaraná” (de Carvalho et al. 1982), por lo tanto la propagación vegetativa representa una oportunidad para ampliar el período productivo, además de mantener clones. Esta situación también se observó en P. elegans (Ghio et al. 2018). En T. catharinensis no existen problemas relacionados a la propagación sexual, no obstante es interesante estudiar la propagación vegetativa con el objetivo de evitar el período juvenil de esta especie, dado que su principal atractivo es su floración. En C. urucurana debe realizarse una selección de la semilla por color para aumentar el porcentaje de germinación y además las semillas se deben someter a alternancia de temperatura (Scalon et al. 2012). En este caso la propagación vegetativa podría ser una técnica más sencilla que la propagación sexual.

El éxito comercial de la reproducción asexual por estacas depende de factores endógenos y exógenos que influyen en el potencial de enraizamiento de las estacas. Dentro de los factores exógenos, uno de los más importantes es la utilización de auxinas sintéticas que se aplican en concentraciones de 500 a 10000 ppm dependiendo del grado de lignificación de la estaca y la presencia o ausencia de hojas (Dole y Gibson 2006). Otro factor importante es el tiempo de inmersión en la solución que va desde segundos a días, dependiendo de la concentración utilizada. El Ácido Naftalén Acético (ANA) es una auxina sintética barata, potente y móvil, por lo que su uso requiere de un ajuste preciso de la dosis y el tiempo de inmersión (Hartmann et al. 2002). Dentro de los factores endógenos, la especie tiene gran relevancia. La bibliografía muestra resultados inconsistentes en el enraizamiento de especies del género Croton que dependen de la posición de la estaca utilizada en la rama (apical, sub-apical, basal), de la presencia de hojas, la inclinación de la estaca en cámara de enraizamiento, del tipo de sustrato utilizado y el tipo y dosis de hormona (Chaves 2016; da Gama et al. 2015; Osakada y Yuyama 2008; Santos et al. 2011). Sumado a esto, antecedentes dentro de la misma familia (Euphorbiaceae) muestran que dosis de 3000 ppm de AIB y 2500 ppm de ANA inducen el enraizamiento y elevan la uniformidad en la producción de raíces (Dole y Gibson 2006). En cuanto al género Tabernaemontana la bibliografía muestra que dosis de 3000 a 5000 ppm de AIB indujeron un alto porcentaje de enraizamiento en estacas semi-leñosas con hojas de T. coronaria, una especie de fácil enraizamiento (Rawat et al. 2014). Por otro lado, los antecedentes en el género Paullinia muestran resultados contradictorios en el enraizamiento de estacas herbáceas con la utilización de AIB entre 0 y 6000 ppm, siendo el factor determinante el clon (Albertino et al. 2012; Arruda et al. 2007; Atroch et al. 2011; Rodrigues y Lucchesi 1987). Trabajos previos muestran que en la familia Sapindaceae existe una falta de respuesta de estacas a promotores de enraizamiento (Amorim et al. 2019).

Material vegetal y área de recolección de muestras

Los propágulos de “Sangre de drago”

(C. urucurana), “Horquetero” (T. catharinensis) y “Ojo de muñeca” (P. elegans) se recolectaron en diferentes áreas de su distribución natural, en los departamentos La Capital, Juan de Garay y San Javier de la provincia de Santa Fe, en los primeros días del mes de Julio del año 2017 (Figura 1). Las especies mencionadas fueron seleccionadas en función de su valor paisajístico representado por su floración, fructificación, follaje, bajos requerimientos de mantenimiento y aptitud para el uso en parques, jardines y/o arbolado urbano de alineación.

Para cada una de las tres especies, se colectaron 200 estacas caulinares, leñosas, homogéneas, de 15 centímetros de longitud aproximadamente, sin tener en cuenta su posición a lo largo del ramo, diámetro de la estaca, ni la posición del ramo en las plantas madres. La tarea de recolección comenzó durante las primeras horas de la mañana. Los propágulos de cada especie se extrajeron de 8 a 10 plantas adultas y en estado silvestre. Estos genotipos se seleccionaron visualmente teniendo en cuenta a aquellos de mejor comportamiento fitosanitario.

Se procedió a la extracción de las estacas, realizando un corte recto en la base, dejando un nudo inmediatamente por encima del mismo y un corte en bisel en el extremo apical. También se llevó a cabo el deshojado de las estacas. Para todos los cortes se utilizaron tijeras correctamente desinfectadas en una solución de hipoclorito de sodio al 50% v/v. Las estacas se desinfectaron realizando dos enjuagues en una solución de hipoclorito de sodio 8% (v/v), posteriormente, se colocaron en bolsas con cierre hermético, identificando cada genotipo y se almacenaron en conservadora termoeléctrica portátil Coleman® en condiciones de baja temperatura 2 ± 3,8 ºC y 90% de HR hasta la aplicación de hormonas.

Tratamientos hormonales y ambiente de propagación

Antes de la inmersión en ANA se efectuó un nuevo lavado del material mediante la inmersión de las estacas en solución de agua con hipoclorito de sodio al 8% (v/v) durante diez minutos. Luego, se realizó una inmersión en fungicida sistémico Carbendazim (50% SC- suspensión concentrada) a una concentración de 3 ml.L^-1 durante el mismo tiempo. Se formaron grupos de 50 estacas con aproximadamente la misma proporción de los genotipos recolectados, para eliminar el efecto genotipo sobre el enraizamiento. A cada uno de estos grupos se le asignó al azar uno de los tratamientos hormonales que se muestran en la tabla 1. Dentro de cada grupo, cada estaca fue individualizada con un número progresivo empezando en el 1 en el primer tratamiento y terminando en 200 en el último tratamiento de cada especie.

Figura 1. Ubicación de los puntos de colecta de estacas de “Sangre de Drago” (Croton urucurana), “Ojo de muñeca” (Paullinia elegans) y “Horquetero” (Tabernaemontana catharinensis) en la provincia de Santa Fe, Argentina. Figure 1. Sampling points of cuttings from “Sangre de Drago” (Croton urucurana), “Ojo de muñeca” (Paullinia elegans) and “Horquetero” (Tabernaemontana catharinensis) in Santa Fe province, Argentina

Tabla 1. Tratamientos hormonales realizados a cada especie y número de estacas por tratamiento. Table 1. NAA dose per species (Concentración de ANA mg/L) and number of cuttings per dose (Nº de estacas pore specie).

	Concentración de ANA (mg.L-1)					N° de Estacas por especie
	0	500	1000	2500	3500
C. urucurana	50	0	50	50	50	200
T. catharinensis	50	0	50	50	50	200
P. elegans	50	50	50	50	0	200

M. Biganzoli et al.

Para los tratamientos hormonales se usó como hormona enraizante al ácido naftalenacético (ANA), sal sódica, pureza 99%, hidrosoluble, marca Dalton®. Aunque la sal es hidrosoluble, en algunas concentraciones se observaba un residuo sólido de la sal que fue disuelto con hidróxido de potasio (KOH) 1 N, en cantidades suficientes y se llevó al volumen deseado con agua destilada. El tiempo de inmersión en la solución hormonal fue de 5 segundos, independientemente de la concentración utilizada. Se optó por el ANA por su mayor actividad hormonal y por su menor costo, en comparación con el AIB, teniendo presente la futura utilización por parte de viveristas.

En una primera instancia las estacas se llevaron a cámara de crecimiento a temperatura controlada (22 ± 1 ºC), y alta HR (90%) para inducir la formación del callo, etapa de “callusing” según Dole y Gibson (2006). Para ello se utilizaron bandejas de 30 x 60 x 20 cm, con perlita agrícola como sustrato, la que previamente fue esterilizada en estufa a 60 ºC durante 3 días y humedecida. Para mantener elevada la HR, cada bandeja fue tapada con bolsas de polietileno negro. Esta etapa tuvo una duración de 60 días durante la cual se monitoreó y registró la aparición de raíces en cada estaca y la presencia de enfermedades, y se realizaron aplicaciones preventivas de Captan.

Una vez formado el callo y detectado el desarrollo inicial de las raíces (largo ≥ 1 mm), las estacas fueron trasladadas a un invernadero de dimensiones 3 x 3 x 3 m para su crecimiento posterior. En esta etapa de crecimiento de raíces, las estacas fueron colocadas en tubetes numerados de 250 cm³ dispuestos en bandejas de 54 unidades, donde se utilizó el sustrato MultiPro™ de la marca GrowMix®, compuesto por turba de musgo Sphagnun spp. de fibras finas, compost de corteza fina, perlita, corrector de pH y fertilizantes. Se instaló un sistema de riego automático (15 minutos de riego por hora, con un volumen de 12 L/h). Se registró la temperatura y HR del ambiente en invernadero a través de datalogger i-Button® (modelo Thermochron. Rango: - 40 a 85 °C y 0 a 100% HR. Resolución: 0,1 °C y 0,5% HR; error: +/- 0,5 °C y +/- 3 %HR) cada 15 minutos. Esta etapa tuvo una duración de 45 días. La duración del experimento completo fue de 105 días.

Variables respuesta analizadas

Una vez finalizado el experimento se registró el enraizamiento de cada estaca (presencia o ausencia de raíces) y el diámetro de las estacas a la altura del cuello (DAC). Por otro lado, se evaluaron las variables de calidad de enraizamiento (longitud total de raíces, diámetro medio de la raíz y volumen de raíces) mediante el software WinRhizo^TM (2016) y un escáner compatible. Para ello se extrajo el total de la masa radicular de aquellas estacas que enraizaron satisfactoriamente y se las conservó en recipientes individuales con FAA (formaldehido, ácido acético, alcohol 96° y agua destilada, en una relación 2:1:10:7). Para cada especie se utilizó un diseño completamente aleatorizado con 4 tratamientos y 50 repeticiones por tratamiento, siendo la unidad experimental una estaca. Los datos de enraizamiento se analizaron mediante el ajuste de Modelos Lineales Generalizados y regresiones logísticas con la función glm del paquete stats del lenguaje de programación estadística R (R Development Core Team 2017), utilizando la función de enlace logit. Dichos modelos tuvieron la forma PE = ANA + DAC + ANA*DAC + Ɛ, donde PE es la probabilidad de enraizamiento, ANA es el efecto de la aplicación de ANA, DAC es el efecto del DAC y ANA*DAC es el efecto de la interacción sobre la probabilidad de enraizamiento, mientras que Ɛ es el error del modelo. Cuando los modelos lineales generalizados mostraron efecto significativo del ANA, se realizó la comparación entre niveles de ANA aplicados mediante la función emmeans del paquete emmeans de R (Lenth 2020). La calidad de enraizamiento se analizó mediante el ajuste de regresiones lineales múltiples con la función lm del paquete stats del lenguaje de programación estadística R (R Development Core Team 2017). La forma de los modelos fue la misma que para probabilidad de enraizamiento y se eligieron las variables a retener por el modelo mediante el procedimiento “stepway” utilizando la función ols_step_ both_p del paquete olsrr (Hebbali 2018). Las figuras se realizaron utilizando el paquete ggplot2 de R (Wickham 2016).

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

“Horquetero” (T. catharinensis)

Los tratamientos realizados en estacas de “Horquetero” no fueron efectivos para inducir su enraizamiento, dado que fue nula la formación de raíces en todos los tratamientos aplicados. No obstante, se pudo observar, que gran parte de las estacas que no emitieron raíz pero que permanecían vivas durante los recuentos, emitieron brotes que murieron al poco tiempo; lo que se debería a que las condiciones ambientales óptimas para el enraizamiento desencadenan la brotación en yemas sin latencia (Chaves 2016). Esta brotación, anterior a la formación de raíces, dificulta el enraizamiento de las estacas debido a que las reservas energéticas son destinadas a la brotación, en lugar de la inducción y crecimiento de raíces, además de provocar desbalances hormonales que también afectan el proceso de enraizamiento (Hartmann et al. 2002).

Los resultados de este trabajo demuestran que T. catharinensis es una especie de difícil enraizamiento a través de la propagación por estacas leñosas sin hojas. Esto contrasta con lo observado en T. coronaria, donde se obtuvo un 90% de enraizamiento de estacas sub-leñosas con hojas sin aplicación de hormonas (Rawat et al. 2014). En esta especie, la inmersión de estacas con hojas de plantas jóvenes en AIB (≥ 3000 ppm) por 10 minutos aumentó al 100% el porcentaje de enraizamiento, y mejoró significativamente el largo, diámetro y número total de raíces. En T. catharinensis, la propagación in vitro de microestacas con hojas a partir de plantas madres jóvenes, produjo un enraizamiento superior al 70 %. Dado que las estacas del presente trabajo se mantuvieron vivas durante el experimento es posible que la ausencia de inducción radicular haya sido consecuencia de una baja concentración de hormona exógena, un corto período de inmersión, la utilización de tejido muy lignificado o la selección de plantas adultas con baja capacidad de enraizamiento, factores muy importantes para la inducción radical en estacas (Hartmann et al. 2002).

“Ojo de muñeca” (P. elegans)

En “Ojo de muñeca” se observó inducción radical en un bajo porcentaje de estacas (13%), como efecto de la aplicación de ANA, sin diferencia entre las concentraciones (p > 0,05). No obstante, existió una relación positiva entre el DAC y la probabilidad de enraizamiento (p = 0,0001); esta última aumentó 0,30 veces por cada milímetro de aumento en el DAC, observándose valores superiores al 50 % con diámetros mayores a 13 mm. (Figura 3). Por otro lado, no hubo efecto de la interacción DAC×ANA (p = 0.56). Este modelo clasificó correctamente al 95% de las estacas como enraizada o no enraizada en función de su DAC. Esto pone de relevancia que P. elegans es una especie de fácil enraizamiento, ya que se indujo la formación de raíces sin utilización de hormonas exógenas en más del 50% de los casos en los que las estacas tenían un diámetro mayor a 13 mm (Figura 3). Esto concuerda con lo demostrado para P. cupana donde el enraizamiento de estacas semi-leñosas con o sin hojas y sin aplicación de hormonas va del 30% al 90% (Albertino et al. 2012; Arruda et al. 2007; Atroch et al. 2011; Rodrigues y Lucchesi 1987). La relación ascendente entre el DAC y la probabilidad de enraizamiento podría ser una consecuencia de la escasez de reservas para abastecer los cambios anatómicos que se desencadenan luego de la inducción a la formación de raíces, en estacas cuyo DAC es inferior a 13 mm. Esta relación entre el porcentaje y calidad de enraizamiento y el tamaño de la estaca fue demostrada para diversas especies (Dias et al. 2013; Martins et al. 2015; Santos et al. 2011). En cuanto a la aplicación de hormonas exógenas, los antecedentes en P. cupana indican que dosis superiores a 50 ppm de AIB inhiben la formación de raíces (Atroch et al. 2011); para esta especie el mayor enraizamiento se produce utilizando estacas con hojas y sometiéndolas a etiolización previo a la disposición en camas de enraizamiento (Rodrigues y Lucchesi 1987). La falta de respuesta de las estacas a promotores exógenos de enraizamiento en el género Paullinia parece ser una característica de la familia Sapindaceae (Amorim et al. 2019) y podría deberse a la presencia de un adecuado balance hormonal para promover el enraizamiento, o a la presencia de raíces adventicias preformadas, como ocurre en otras especies (Hartmann et al. 2002). Nuevos experimentos de enraizamiento con P. elegans deberían realizarse en estacas semi-leñosas con DAC superior a 13 mm y presencia de hojas, o previa etiolización de los ramos que darán origen a las estacas.

M. Biganzoli et al.

Figura 3. Efecto del diámetro a la altura del cuello de la estaca (DAC) sobre la probabilidad de enraizamiento de estacas leñosas sin hojas de Paullinia elegans. Figure 3. Cutting diameter (DAC) effect on the rooting probability of Paullinia elegans cuttings.

Efecto de dosis crecientes de ANA en la calidad de enraizamiento

Los datos que se muestran son los de “Sangre de drago” (C. urucurana), ya que en las otras dos especies el enraizamiento provocado por las dosis de ANA fue nulo o despreciable.

Diámetro medio de raíces

El diámetro medio de las raíces no fue influenciado por el tratamiento hormonal (p > 0,05), ni por el DAC (p > 0,05), ni por la interacción DAC*ANA (p > 0,05). El diámetro medio de las raíces, independientemente del tratamiento hormonal recibido, fue de 0,80 mm.

30

20

10



Longitud total de raíces (cm)

Figura 4. Efecto del diámetro de la estaca (DAC) sobre la longitud total de raíces (LTR) en Croton urucurana. (●), sin aplicación de ANA, (▲) 1000 ppm de ANA, (■) 2500 ppm de ANA y (+) 3500 ppm de ANA. LTR = 1,775 * DAC – 7,314. Figure 4. Cutting diameter (DAC) effect on total root length (TRL) of Croton urucurana cuttings. (●) Control, (▲) 1000 ppm of NAA, (■) 2500 ppm of NAA and (+) 3500 ppm of NAA. TRL =

1.775 * DAC – 7.314.

1.0

0.9

Diamétro medio de la raíz (mm)

0.8

0.7

0.6



Figura 5. Diámetro medio de raíces en estacas de Croton urucurana. (●) sin aplicación de ANA, (▲) 1000 ppm de ANA, (■) 2500 ppm de ANA y (+) 3500 ppm de ANA. Figure 5. Cutting diameter effect (DAC) on average root diameter (ARD) of Croton urucurana cuttings. (●) Control, (▲) 1000 ppm of NAA, (■) 2500 ppm of NAA and (+) 3500 ppm of NAA. ARD = 0.8 mm

Revista FAVE - Ciencias Agrarias 20 (1) 2021 |

M. Biganzoli et al.

CONCLUSIONES



AGRADECIMIENTOS

Este trabajo se desarrolló con fondos provenientes del proyecto CAI+D Orientado a Problemas Sociales y Productivos, titulado “Introducción de especies nativas con potencial ornamental al mercado florícola”, y del CAI+D “Aprovechamiento sustentable de productos forestales no madereros de especies nativas del Chaco

argentino” (código 50020150100003LI),

ambos financiados por la Universidad Na

cional del Litoral. Queremos agradecer al Dr. Agustín

Alesso de la Cátedra de Estadística de la

Facultad de Ciencias Agrarias de la Univer

sidad Nacional del Litoral por su ayuda con

el manejo de R.

BIBLIOGRAFÍA

Albertino SMF, Filho N, Do FJ, Silva JF da, Atroch AL, Galvão AK de L. Enraizamento de estacas de cultivares de guaranazeiro com adubação de plantas matrizes. Pesquisa Agropecuária Brasileira. 2012 Oct;47(10):1449–54.

Almeida FD de, Xavier A, Dias JMM, Paiva HN. Eficiência das auxinas (AIB e ANA) no enraizamento de miniestacas de clones de Eucalyptus cloeziana F. Muell. Revista Árvore. Sociedade de Investigações Florestais; 2007;31(3):455–63.

Amaya JZE, Yuyama K, Chagas EA, Fernández IM, Sakazaki RT, Neto JLLM. Management of Propagation Techniques of the Specie Croton lechleri Muell.Arg. Journal of Agricultural Science. 2019 May 15;11(6):486.

Amorim T de A, Coelho NL, Somner GV, Amorim T de A, Coelho NL, Somner GV. What is the Effect of Thiamine Hydrochloride on Rooting of Sapindaceae Stem Cuttings? Floresta e Ambiente [Internet]. Instituto de Florestas da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro; 2019 [cited 2020 Mar 4];26(3). Available from: http://www. scielo.br/scielo.php?script=sci_abstract&pid=S2179-80872019000300404&lng=en&nrm=iso&tlng=en

Martins JCR, Garrido M da S, Menezes RSC, Dutra ED, Primo DC, Jesus KN de. Desenvolvimento inicial de mudas de gliricídia e maniçoba preparadas com estacas de quatro comprimentos - DOI:10.5039/ agraria.v7i2a1533. Revista Brasileira de Ciências Agrárias (Agrária). 2015 Jun 30;7(2):322–7.

Mata D, Facciuto G, Botto F. Investigación científica y plantas ornamentales. Ciencia Hoy [Internet]. 2013 [citado 2020 Mar 17]. Disponible en: https://cienciahoy.org. ar/2013/12/investigacion-cientifica-y-plantas-ornamentales/

Ming LC. Rooting of cuttings of Lippia alba (Mill.) N.E.BR. - Verbenaceae. Acta Hortic. 1996 Aug;(426):643–6.

Morisigue, D. La floricultura genera más de U$S 200 M anuales. INTA Informa [Internet]. 2011 [citado 2020 Mar 17]. Disponible en: https:// intainforma.inta.gob.ar/%E2%80%9Cla-floricultura-genera-mas-de-us-200-m-anuales%E2%80%9D/.

Morisigue, D., 2017. Flores que generan equidad. INTA Informa. Año 15. Nº 171. ISBN 2362-5287.

Osakada A, Yuyama K. Propagação vegetativa de Sangue-de-dragão (Croton lechleri müll. Arg.) na Amazônia central. Anais do 59o Congresso Nacional de Botânica. Natal, Rio Grande do Norte. Brazil: Sociedade Botânica do Brasil; 2008. p. 1.

R Development Core Team. R: A Language and Environment for Statistical Computing [Internet]. Vienna, Austria: R Foundation for Statistical Computing; 2017. Available from: http://www.R-project.org

Rawat J, Singh K, Rawat V, Singh B. Effect of methods of IBA application on rooting performance of crape jasmine (Chandani) softwood cuttings. HortFlora Research Spectrum. 2014;3(2):146–9.

Richmond A. Estudio de cuatro métodos de propagación de cinco especies forestales. Universidad de Costa Rica, San José (Costa Rica) CATIE, Turrialba (Costa Rica); 1984 [cited 2020 Mar 16]; Available from: http:// repositorio.bibliotecaorton.catie.ac.cr:80/ handle/11554/4984

Rodrigues JELF, Lucchesi AA. Propagação vegetativa do guaranazeiro (Paullinia cupana (Mart.) Ducke) através de estacas induzidas (capeadas) e com ácido indolilbutirico. Anais da Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz. 1987 Jan 1;44(1):1–20.

Santelices R. Efecto del árbol madre sobre la rizogénesis de Nothofagus alessandrii. Bosque (Valdivia). 2005 Dec;26(3):133–6.

Santos J de P dos, Davide AC, Teixeira LAF, Melo AJS, Melo LA de. Enraizamento de estacas lenhosas de espécies florestais. CERNE. Universidade Federal de Lavras; 2011 Sep;17(3):293–301.

Scalon SPQ, Mussury RM, Lima AA. Germination of Croton urucurana L. seeds exposed to different storage temperatures and pre-germinative treatments. Anais da Academia Brasileira de Ciências. Academia Brasileira de Ciências; 2012 Mar;84(1):191–200.

Silva LF de O da, Oliveira AF de, Pio R, Zambon CR, Oliveira DL. Enraizamento de estacas semilenhosas de cultivares de oliveira. Bragantia. 2012;71(4):488–92.

Soto MS, Greppi JA, Facciuto G. Exploration and Collection of Ornamental Germplasm Native to Argentina. Floriculture and Ornamental Biotechnology. 2011;5(1):10–22.

Wickham H. ggplot2: Elegant Graphics for Data Analysis [Internet]. Springer-Verlag New York,; 2016. Available from: https://ggplot2. tidyverse.org

WinRHIZO. Quebec, Canada: Regent Instruments; 2016.