Validación de un método analítico para la extracción y determinación de enrofloxacina y su metabolito ciprofloxacina en plasma y tejidos de truchas (Oncorhynchus mykiss)

Resumen

Se aplicó un nuevo pre-tratamiento y validación de una técnica analítica para determinar enrofloxacina y ciprofloxacina en plasma y tejidos de truchas. El pre-tratamiento consistió en agregar 300 μL o mg de plasma o tejido blanco a 300 μL de tricloroacético al 50% y homogenizar por 5 minutos, manteniendo luego las muestras por 12 horas a 4°C, centrifugado 30 minutos a 13.500 rpm. Independientemente de la matriz analizada se recuperaron 150 μL del sobrenadante y agregaron 150 μL de concentraciones conocidas de enrofloxacina o ciprofloxacina, marbofloxacina como estándar interno y 600 μL de metanol. Finalmente, las muestras se centrifugaron 15 minutos a 13.500 rpm, y 100 μL del sobrenadante se inyectaron en un cromatógrafo con detector de fluorescencia establecido a emisión de 218 nm y excitación de 477 nm. La elución isocrática se realizó a temperatura ambiente en fase reversa empleando fase móvil compuesta por agua, acetonitrilo y trietilamina. La validación de la técnica incluyó ensayos de linealidad, límites de detección y cuantificación y precisión intradía e interdía, recuperabilidad y selectividad. El método requiere mínimo pretratamiento de muestras para la extracción y determinación de ambos analitos, con elevada precisión, proporciona recuperaciones aceptables y límites de detección inferiores a los LMR establecidos.