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Optimización de la Producción de Eritropoyetina Humana Recombinante (rhEPO) Mediante el Cultivo de Células Animales

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dc.contributor.advisor Etcheverrigaray, Marina
dc.contributor.author Didier, Caroline
dc.contributor.other Claus, Juan Daniel
dc.contributor.other Olivieri, Alejandro Cesar
dc.contributor.other Rodriguez, Joaquin Valentin
dc.date.accessioned 2010-06-28T14:39:17Z
dc.date.available 2010-06-28T14:39:17Z
dc.date.issued 2008-05-21T14:39:17Z
dc.identifier.uri http://hdl.handle.net/11185/173
dc.description Fil: Didier, Caroline. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas; Argentina.
dc.description.abstract En este trabajo se presentan los resultados obtenidos durante la optimización de la producción de eritropoyetina humana recombinante (rhEPO) en cultivo de células CHO (Chinese Hamster Ovary cells), partiendo de la selección de un nuevo clon productor, el estudio del efecto de aditivos y variables fisicoquímicas sobre el crecimiento, productividad y patrón de isoformas producidas, y finalmente, el diseño racional de medios de cultivos que permiten obtener una molécula de alta calidad glicosídica. Inicialmente se clonaron líneas celulares recombinantes productoras de rhEPO. Los clones seleccionados fueron adaptados a crecer en suspensión, en medios de cultivo de bajo contenido de suero y libre de proteínas, estudiándose el efecto que ejercen sobre el metabolismo diferentes metodologías de adaptación a suspensión, concentraciones de suero y sistemas de cultivo. Utilizando un diseño factorial se evaluó la influencia de la adición de aminoazúcares, la acumulación del ion amonio en sobrenadante y el efecto de la osmolalidad, sobre el crecimiento, la productividad y el patrón de glicosilación. Posteriormente, y mediante un diseño experimental de mezclas cruzadas con limitaciones, acoplado a un análisis multivariado de las respuestas (a través de las metodologías de superficies de respuesta o de redes neuronales artificiales), seguido de un proceso de optimización, se diseñaron dos medios de cultivo con el objetivo de optimizar la producción de rhEPO. Estos medios fueron utilizados durante el cultivo del clon productor en un biorreactor tipo tanque agitado, en modo continuo con perfusión, obteniéndose una molécula de rhEPO de alta calidad glicosídica. es
dc.description.abstract In this thesis report, we present the results obtained during the optimization of the production of recombinant human erythropoietin (rhEPO) in Chinese Hamster Ovary (CHO) cell culture, involving the selection of a new clone, the study of the effect of new additives and physicochemical variables on growth, productivity and isoform pattern, and finally, the rational design of culture media in which highly glycosylated rhEPO molecules are obtained. Firstly, recombinant cell lines producing rhEPO were cloned. The selected clones were adapted to grow in suspension mode in both low-serum-content medium and protein-free medium. The effect of different methodologies to adapt cells to suspension growth, as well as different serum concentrations and culture systems were studied. The effect of addition of aminosugars, as well as the accumulation of ammonium ion in the supernatant were evaluated using a factorial design. The variability in supernatant osmolality was also analyzed. Two culture media which improve rhEPO production were designed using a constrained crossed mixture experimental design, followed by multivariate analysis of responses: firstly, through a response surface methodology, and later, by artificial neural networks, coupled to an optimization process. The formulated media were used to cultivate the selected clone in a stirred tank bioreactor, in a perfused continuous mode, accomplishing the pursued goal, a highly glycosylated molecule. en
dc.description.sponsorship Universidad Nacional del Litoral
dc.description.sponsorship Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas
dc.description.sponsorship Zelltek
dc.format application/pdf
dc.format.mimetype application/pdf
dc.language spa
dc.language.iso spa es
dc.rights info:eu-repo/semantics/openAccess
dc.rights.uri http://bibliotecavirtual.unl.edu.ar/licencia.html
dc.subject Recombinant human erythropoietin en
dc.subject Culture media optimization en
dc.subject Suspension continuous culture en
dc.subject Perfused bioreactor en
dc.subject Response surface methodology en
dc.subject Artificial neural networks en
dc.subject Eritropoyetina humana recombinante es
dc.subject Optimización de medios de cultivo es
dc.subject Cultivo continuo en suspensión es
dc.subject Biorreactor con perfusión es
dc.subject Metodología de superficies de respuesta es
dc.subject Redes neuronales artificiales es
dc.title Optimización de la Producción de Eritropoyetina Humana Recombinante (rhEPO) Mediante el Cultivo de Células Animales es
dc.title.alternative Optimization of the Production of Recombinant Human Erythropoietin (rhEPO) by Means of Animal Cells Culture en
dc.type info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
dc.type info:ar-repo/semantics/tesis doctoral
dc.type info:eu-repo/semantics/acceptedVersion
dc.type SNRD
dc.type Thesis es
dc.contributor.coadvisor Kratje, Ricardo
unl.formato application/pdf
unl.versionformato 1a
unl.tipoformato PDF/A-1a


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