Análisis preclínico de la utilidad de la formulación de subunidades proteicas Trans-sialidasa- ISPA para su uso profiláctico y terapéutico

Abstract

Actualmente se calcula que 6 millones de personas se encuentran infectadas por Trypanosoma cruzi alrededor del mundo. Para el tratamiento de esta infección existen dos drogas: Benznidazol (Bz) y Nifurtimox, las cuales mostraron ser efectivas en la fase aguda de la enfermedad, pero no en la fase crónica. En base a esto, se propuso evaluar a las subunidades TSNt y TSf de la proteína Trans-sialidasa como vacunas profilácticas. Además, se ensayó el agregado de las proteínas CP3 y ASP2, los cuales se evaluaron en forma individual y combinados, formulados con el adyuvante ISPA. Se inmunizaron ratones BALB/c y se desafiaron con T. cruzi Tulahuen cl2. Se evaluó la parasitemia, supervivencia y peso. Se observó que la mezcla TSNt+TSf logró los mayores valores de supervivencia y que el agregado de CP3 y ASP2 no mejoró el desempeño de los fragmentos de Trans-sialidasa. Por otra parte, se evaluó la formulación TSNt-ISPA como vacuna terapéutica, se comparó con el tratamiento con Bz y se ensayó un tratamiento mixto TSNt+Bz. Se emplearon dos modelos de infección: BALB/c-SylvioX10/4 y BALB/c-Tulahuen cl2. Se infectaron los ratones y al día 120 post infección (pi) se administraron los tratamientos. Al día 265 pi se realizaron electrocardiogramas y se evaluó carga parasitaria en corazón. Se observó que la formulación TSNt-ISPA logró disminuir la parasitemia y el porcentaje de arritmias, y que el tratamiento con Bz no logró la misma efectividad. El tratamiento TSNt+Bz evidenció la menor carga parasitaria, disminuyó los parámetros QRS y QTc y el porcentaje de arritmias.

Actually it is estimated that 6 million people are infected with Trypanosoma cruzi around the world. There are two drugs available for this infection: Benznidazol (Bz) and Nifurtimox. This drugs have been shown to be effective in the acute phase of the disease, but not in the chronic phase. This thesis aimed to evaluate subunits of the Trans-sialidase protein (TSNt and TSf) as prophylactic vaccine conjugated with CP3 and ASP2 proteins. All these antigens were assessed alone and in combination formulated with the ISPA adjuvant. BALB/c mice were immunized with this formulations and were challenged with T. cruzi Tulahuen cl2. Parasitaemia, survival and weight were evaluated. It was observed that the mixture TSNt+TSf achieved the highest survival values and that the addition of CP3 and ASP2 did not improve the performance of the Trans-sialidase fragments. On the other hand, the TSNt-ISPA formulation was evaluated as a therapeutic vaccine in a chronic phase. The efficacy of the drug Bz alone was tested, as well as a mixed TSNt+Bz treatment. Two infection models were used: BALB/c-SylvioX10/4 and BALB/c-Tulahuen cl2. Mice were infected and at day 120 post infection (pi) the treatments were administered. At day 265 pi, electrocardiograms were performed and heart parasite load was evaluated. It was observed that the TSNt-ISPA formulation reduce parasitaemia and the percentage of arrhythmias. The Bz treatment did not achieve the same effectiveness. The mixed treatment TSNt+Bz showed the lowest parasite load, decreased the QRS and QTc parameters and the percentage of arrhythmias.