Estudio de β-lactamasas de espectro extendido y AmpC plasmídicas en Enterobacterales. Caracterización de plásmidos movilizables y conjugativos

Abstract

Se estudiaron 60 aislamientos de Enterobacterales resistentes a cefalosporinas de tercera generación (CTG) colectados en Santa Fe durante dos meses no consecutivos. Un 25% de estos aislamientos mostraron fenotipo de resistencia disociada a CTG (FRS-CTG). En todos los casos se registró el mismo fenotipo: cefotaxima resistente y ceftazidima sensible, y tal fenotipo se observó principalmente en aislamientos de E. coli y P. mirabilis asociado a CTX-M-2 y CTX-M-14. Además, dos aislamientos productores de AmpC plasmídicas (CMY-2) también mostraron este fenotipo. Por medio de curvas de letalidad se observó que aquellos aislamientos que poseen como mecanismo CMY-2 con FRS-CTG no son afectados por ceftazidima. Por el contrario, la utilización de cefepime, muestra el comportamiento opuesto (actividad bactericida). En contrapartida, cuando el mecanismo implicado es CTX-M-2 o CTX-M-14, ceftazidima tiene efecto bactericida y no así cefepime. Este comportamiento diferencial dependiente del mecanismo de resistencia reafirma el hecho de que es riesgoso definir el tratamiento basándolo solamente en los puntos de corte propuestos por el Clinical Laboratory Standards Institute y no tener en cuenta la enzima implicada. Mediante secuenciación y análisis bioinformático se caracterizaron los plásmidos pN1 y pSeT97. La secuencia pN1 presenta elevada identidad con plásmidos caracterizados en la región, mostrando el éxito de esta plataforma génica para prevalecer en el ambiente y generar impacto a nivel clínico. Por su parte, pSeT97 es la primera secuencia parcial de un plásmido portador de blaCTX-M-14 descrita en nuestro país el cual está asociado a un aislamiento de S. Typhimurium recuperada de un brote nosocomial.

Sixty resistant to third-generation cephalosporins (TGC) Enterobacterales isolates collected from Santa Fe for two non-consecutive months were studied. From these isolates, 25% showed a phenotype of dissociated resistance to TGC (PDR-TGC). The same phenotype was observed in all cases: resistance to cefotaxime and susceptibility to ceftazidime, and this phenotype was mainly demonstrated in E. coli and P. mirabilis isolates associated with CTX-M-2 and CTX-M-14. In addition, two plasmid AmpC-producing (CMY-2) isolates also showed this phenotype. By means time-kill experiments, it was shown those isolates that have a CMY-2 as mechanism with PDR-TGC were not affected by ceftazidime. On the contrary, the use of cefepime showed opposite behavior (bactericidal activity). In contrast, when mechanism involved was CTX-M-2 or CTX-M-14, ceftazidime has a bactericidal effect and cefepime does not. This differential behavior dependent on the resistance mechanism reaffirms the fact that is risky to define the treatment based solely on the cut-off points proposed by the Clinical Laboratory Standards Institute and not taking into account the enzyme involved. Plasmids pN1 and pSeT97 were characterized by sequencing and bioinformatic analysis. The pN1 sequence shows high identity with other plasmids characterized in our region, showing success of this gene platform to prevail into environment and generate clinical impact. On the other hand, pSeT97 is the first partial sequence of a plasmid carrying blaCTX-M-14 described in our country, which is associated with an isolate of S. Typhimurium recovered from a nosocomial outbreak.