Ajustes para la producción del adyuvante de desarrollo local ISPA y obtención de variantes del mismo con mayores capacidades inmunoestimulantes

Abstract

En un trabajo previo realizado en el Laboratorio de Tecnología Inmunológica de la FBCB-UNL, se describió una formulación adyuvante denominada ISPA (Partícula Inmunoestimulante) compuesta por nanopartículas tipo jaula. Si bien el adyuvante ISPA puede prepararse por un método simple y más económico que los descritos anteriormente para las partículas tipo jaula, su preparación requiere fosfolípidos comerciales, saponinas y colesterol que son costosos, haciendo inviable su uso en vacunas veterinarias. Con esta finalidad se trabajó en base a dos objetivos: i) Desarrollar un proceso que permita la obtención de Quil-A® con alta actividad adyuvante y baja toxicidad a partir de extractos crudos de Quillaja saponaria que estén disponibles en el mercado y que sean de bajo costo. ii) Evaluar lípidos de diferentes fuentes tales como fosfolípidos comerciales, naturales o de residuos industriales que permitan la obtención de jaulas lipídicas y reduzcan el costo de su preparación. Como tercer objetivo se planteó obtener variantes potenciadas del adyuvante que permitan mayores respuestas inmunológicas en el caso de ser necesario. Se describe un insumo económico y un método que permite obtener un extracto de saponina con características fisicoquímicas y funcionales similares a QuilA® y también un método para obtener un extracto de yema de huevo que permite remplazar a los lípidos del adyuvante. Además, se determinó que la suplementación del adyuvante ISPA con rapamicina y o c-di-AMPc induce resultados prometedores para mejorar la respuesta inmunológica.

In a previous work carried out at the Laboratory of Immunological Technology of the FBCB-UNL, an adjuvant formulation called ISPA (Immunostimulant Particle) composed of cage-like nanoparticles was described. Although the ISPA adjuvant may be prepared by a simple and cheaper method than those described above for cage-like particles, its preparation requires expensive commercial phospholipids, saponins and cholesterol, making unfeasible its use in veterinary vaccines. To this end, we worked to afford two objectives: i) Developping a process to obtain Quil-A® with high adjuvant activity and low toxicity from crude extracts of Quillaja saponaria that are commercially available with low cost. ii) Evaluating lipids from different sources such as commercial, natural sources or coming from industrial waste phospholipids useful to prepare the particles but that patentially reduce the cost of particles preparation. The third objective was to obtain enhanced variants of the adjuvant that allow greater immunological responses if necessary. An economic reagent and a method that allows obtaining a saponin extract with physicochemical and functional characteristics similar to QuilA® and also a method to obtain an egg yolk extract that allows the replacement of adjuvant lipids are described. In addition, it was determined that the supplementation of the ISPA adjuvant with rapamycin and or c-di-cAMP induces promising results to potentiate ISPA adjuvant.