Síntesis controlada y caracterización de complejos látex-proteína para detección de toxoplasmosis aguda mediante pruebas de inmunoaglutinación

Abstract

La Toxoplasmosis, enfermedad causada por el parásito Toxoplasma gondii, cuando es adquirida durante la etapa de gestación puede provocar aborto, malformaciones, macro o microcefalia y lesiones oculares. El diagnóstico adecuado y el tratamiento oportuno constituyen la mejor manera tanto para prevenir la transmisión transplacentaria, como para reducir la morbimortalidad y las secuelas de la Toxoplasmosis congénita. El diagnóstico de la Toxoplasmosis se basa fundamentalmente en la búsqueda de anticuerpos (Ac) específicos en suero. Una de las técnicas empleadas es la inmunoaglutinación (IA), la cual emplea partículas de látex como soporte de biomoléculas con el objetivo de amplificar la reacción antígeno-anticuerpo (Ag-Ac). En una reacción de IA, los complejos látex-proteína (CLP) son reconocidos por los Ac específicos presentes en los sueros y forman una red de aglutinación. La IA presenta las ventajas de ser rápida, sencilla, económica y de gran utilidad para su utilización en tamizajes. El objetivo de esta Tesis fue obtener CLP útiles como reactivos de IA en la detección de Toxoplasmosis recientemente adquirida. El trabajo se dividió en cuatro etapas: I) síntesis controlada, limpieza y caracterización de látex funcionalizados; II) producción de proteínas antigénicas del T. gondii; III) síntesis de CLP mediante adsorción física y/o unión covalente; y IV) aplicación de los CLP en ensayos de IA frente a un panel de sueros. Los resultados obtenidos indican que los CLP podrían resultar adecuados como reactivos de IA para detectar la fase aguda de la Toxoplasmosis, aunque para confirmar estos resultados se debería evaluar un panel de sueros mayor.

Toxoplasmosis is a worldwide disease caused by the parasite Toxoplasma gondii, which acquired during gestation can cause abortion, malformations, macro or microcephaly and eye damage. Precise diagnosis and quick treatment are the best way to prevent transplacental transmission and reduce morbidity and mortality. Diagnosis of Toxoplasmosis is mainly based on serological tests, which involves searching for specific antibodies (Ab). One way to detect specific Ab in serum is by the latex agglutination test (LAT), which employs latex particles as support of biomolecules, in order to amplify the antigen-antibody (Ag-Ab) reaction. In the immunoagglutination assays (IA), latex-protein complexes (LPC) are recognized by specific Ab present in the sera of infected patients, thus producing immunoagglutination. LAT is a fast and cheap detection method, which results particularly useful for screening purposes. The goal of this Thesis was to obtain LPC useful as LAT for detecting recently acquired Toxoplasmosis. The experimental work was divided into four stages: I) controlled synthesis, cleaning and characterization of functionalized latexes; II) production and quantification of antigenic proteins of T. gondii; III) synthesis of the LPC by physical adsorption or covalent coupling; and IV) application of the LPC in IA. It was possible to obtain latex particles coated with T. gondii antigens which were evaluated on IA assays against a panel of sera. Under the tested experimental conditions, the LPC were suitable as LAT reagents for detecting the acute phase of Toxoplasmosis, although they should be evaluated against a larger panel of sera to confirm the obtained results.