Comparación de métodos de extracción de ADN simples y económicos para el diagnóstico molecular de leptospirosis animal

Autores/as

  • Micaela HAMER
  • Vanina SARAULLO
  • Bibiana BRIHUEGA
  • Olivia WATANABE
  • Mara MARTINEZ
  • Sylvia GRUNE LOFFLER

DOI:

https://doi.org/10.14409/favecv.v18i2.8752

Resumen

La leptospirosis bovina es una importante enfermedad zoonótica cuyo diagnóstico molecular está ampliamente divulgado. Sin embargo, no existe un método único de extracción de ADN para leptospiras patógenas a partir de muestras clínicas. En este trabajo se utilizó orina bovina contaminada con cultivo de L. interrogans serovar Pomona Pomona para analizar el mejor método comparando: M1.) resina Chelex-100, M2.) papel FTA Whatman y M3.) hervido de la muestra (protocolo casero). De estas tres técnicas, la primera (M1) presentó la mayor sensibilidad al realizar la PCR de diagnóstico, detectándose hasta 2x102 leptospiras/mL. La metodología aquí planteada resultó tener buen rendimiento para la detección de leptospiras en muestras clínicas animales, aunque es necesario su validación con mayor número y diversidad de muestras.

Citas

Ahmed A, Klaasen HLBM, van der Veen M, van der Linden H, Goris MGA, Hartskeerl RA. 2012. Evaluation of real-time PCR and culturing for the detection of leptospires in canine samples. Adv. Mircobiol. 2: 162-170.

Boggia V. 2013. Diagnóstico de leptospirosis en bovinos mediante la reacción en cadena de la polimerasa. Tesis en licenciatura en ciencias biológicas. Universidad Nacional de Mar del Plata e Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria.

Draghi MG, Brihuega B, Benítez D, Sala JM, Biotti GM, Pereyra M, Homse A, Guariniello L. 2011. Brote de leptospirosis en terneros en recría en la provincia de Corrientes, Argentina. Rev. Arg. Microbiol. 43: 42-44.

Fata A, Khamesipour A, Mohajery M, Hosseininejad Z, Afzalaghaei M, Berenji F, Ganjbakhsh M, Akhavan A, Eskandari E, Amin-Mohammadi A. 2009. Whatman Paper (FTA Cards) for storing and transferring Leishmania DNA for PCR examination. Iranian J. Parasitol. 4: 37-42.

Gravekamp C, van de Kemp, Franzen M, Carrington D, Schoone GJ, van Eys GJJM, Everard COR, Hartskeerl RA, Terpstra WJ. 1993. Detection of seven species of pathogenic leptospires by PCR using two sets of primers. J. Gen. Microbiol. 139: 1691-1700.

Grune Loffler S, Leiva C, Scialfa E, Redondo L, Florin-Chistensen M, Martínez M, Romero G, Brihuega B. 2016. Detection of pathogenic leptospiral DNA traces in canine sera serum samples by Loop Mediated Isothermal Amplification (LAMP). Immunol. Infect. Dis. 4: 39-43.

Hamond C, Martins G, Loureiro AP, Pestana C, Lawson-Ferreira R, Medeiros MA, Lilenbaum W. 2014. Urinary PCR as an increasingly useful tool for an accurate diagnosis of leptospirosis in livestock. Vet. Res. Commun. 38: 81-85.

Lilenbaum W, Varges R, Brandao FZ, Cortex A, deSouza SO, Brandao PE, Richtzenhain LJ, Vasconcellos SA. 2008. Detection of Leptospira spp. in semen and vaginal fluids of goats and sheep by polymerase chain reaction. Theriogenology 69: 837-842.

López M, Rivera MG, Viettri M, Lares M, Morocoima A, Herrera L, Ferrer E. 2014. Comparación de dos protocolos de extracción de ADN de Trypanosoma cruzi cultivados en medio axénico. Rev. Peru. Med. Exp. Salud Publica 31: 222-227.

Noda AA, Rodríguez I. 2014a. DNA isolation by Chelex-100: an efficient approach to consider in leptospirosis early stages. J. Coast. Lif. Med. 2: 501-504.

Noda AA, Rodriguez I, Rodríguez Y, Govín A, Fernández C, Obregón AM. 2014b. High sensitive PCR method for detection of pathogenic Leptospira spp. in paraffin-embedded tissues. Inst. Med. Trop. Sao Paulo. 56: 411-415.

OIE (World Organization for Animal Health). 2014. Leptospirosis. En: Manual of diagnostic tests and vaccines for terrestrial animals. OIE, Paris.

Oliveira ST, Messick JB, Biondo AW, Santos AP, Guimaraes AMS, Mohamed AS, Pires Neto JAS, Dalmolin ML, Gonzalez FHD. 2010. Serum and urinary C-reactive protein concentractions in dogs with leptospirosis. Acta Scientiae Veterinariae 38: 245-249.

Osorio J, Pachajoa H, Hurtado P. 2013. Concentración y pureza del ADN de muestras sanguíneas en papel Whatman FTA almacenadas entre 1 a 3 años. Rev. Estomatol. Salud 21: 35-38.

Pavan ME, Cairó F, Brihuega B, Samartino L. 2008. Multiple-locus variable-number tandem repeat analysis (MLVA) of Leptospira interrogans serovar Pomona from Argentina reveals four new genotypes. Comp. Immunol. Microbiol. Infect. Dis. 31: 37-45.

Wolfgramm EV, Carvalho FM, Aguiar VRC, Sartori MPN, Hirschfeld-Campolongo GC, Tsutsumida WM, Louro ID. 2009. Simplified buccal DNA extraction with FTA Elute Cards. Ferensic Sci. Int. Genet. 3: 125-127.

Xu C, Loftis A, Ahluwalia SK, Gao D, Verma A, Wang C, Kaltenboeck B. 2014. Diagnosis of canine leptospirosis by a highly sensitive FRET-PCR targeting the lig genes. PLoS ONE 9: e89507.

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Publicado

12/03/2019

Cómo citar

HAMER, M., SARAULLO, V., BRIHUEGA, B., WATANABE, O., MARTINEZ, M., & GRUNE LOFFLER, S. (2019). Comparación de métodos de extracción de ADN simples y económicos para el diagnóstico molecular de leptospirosis animal. FAVE Sección Ciencias Veterinarias, 18(2), 68–73. https://doi.org/10.14409/favecv.v18i2.8752